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| 一种不同乙酰度的N-乙酰化壳六糖的分离纯化方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201310006368.4, 申请日期: 2014-03-05, 公开日期: 2014-03-05
发明人: 李鹏程 ; 李克成; 邢荣娥; 刘松; 于华华; 秦玉坤
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一种不同乙酰度的n?乙酰化壳六糖的分离纯化方法 其特征在于：将全脱乙酰化壳六糖进行乙酰化后得到n?乙酰化壳六糖混合物 所得n?乙酰化壳六糖混合物溶解后用离子交换色谱柱以含0?2m浓度的nacl的缓冲溶液 在ph3?6 2?5mlmin?1流速下进行分离纯化 以糖含量收集含有寡糖的不同组分的洗脱液 将不同组分的洗脱液分别经活性碳萃取脱盐后浓缩 即得到n?乙酰化壳六糖、n n’?二乙酰化壳六糖、n N’ n”?三乙酰化壳六糖、n N’ N” n”’?四乙酰化壳六糖、n N’ N” N”’ n””?五乙酰化壳六糖、n N’ N” N”’ N”” n””’?六乙酰化壳六糖。 |
| 一种乙酰化壳三糖的制备方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201210259734.2, 申请日期: 2012-12-19, 公开日期: 2012-12-19
发明人: 李鹏程; 李克成; 邢荣娥; 刘松; 于华华; 秦玉坤; 李荣峰
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一种乙酰化壳三糖的制备方法 其特征在于：将全脱乙酰化壳三糖进行乙酰化后得到n?乙酰化壳三糖混合物 所得n?乙酰化壳三糖混合物溶解后用离子交换色谱柱以0?1m浓度的nacl溶液 2?5mlmin?1流速下进行分离纯化 收集0?15min 16?35min的洗脱液 将洗脱组分分别经活性碳萃取脱盐后浓缩 即得到n n’?二乙酰化壳三糖和n?乙酰化壳三糖。 |
| 一种单一聚合度壳寡糖制备方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201210146042.7, 申请日期: 2012-09-05, 公开日期: 2012-09-05
发明人: 李鹏程; 李克成; 邢荣娥; 刘松; 于华华; 秦玉坤; 李荣锋; 孟祥涛; 李冰
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一种单一聚合度壳寡糖的制备方法 其特征在于：将全脱乙酰化壳寡糖溶解过滤后用离子交换色谱柱cm?sephadex?c?25以0?3m浓度的nacl溶液在2?5ml/min?1的流速下进行分离纯化 收集240?360min、360?460min、460?560min、560?640min、640?720min、720?780min、780?840min的洗脱液 将所得洗脱液分别经活性碳萃取脱盐后浓缩 即得到单一聚合度全脱乙酰化壳寡糖。 |
| 一种从沙蜇刺丝囊毒素内分离溶血毒素蛋白的方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201110414952.4, 申请日期: 2012-06-27, 公开日期: 2012-06-27
发明人: 李鹏程; 李荣锋; 于华华; 邢荣娥; 刘松; 秦玉坤; 李克成; 李冰; 孟祥涛; 崔金会
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一种从沙蜇刺丝囊毒素中分离溶血毒素蛋白的方法 收集采用含0.2m?nacl的磷酸缓冲液洗脱下的组分 其特征在于：1)将处理后的沙蜇刺丝囊细胞上清液经微孔滤膜过滤 所述洗脱液为含不同浓度nacl的磷酸缓冲液 滤液经含deae?sepharose?fast?flow阴离子交换柱 Nacl浓度分别为0、0.1、0.2、0.3和2m 采用洗脱液以1?3mlmin?1流速进行纯化分离 2)将上述所得洗脱组分经微孔滤膜过滤 收集洗脱液在低温下用3～5k的超滤管进行浓缩 滤液经凝胶色谱柱superdex200采用0.15m?nacl 待用 10～50mm ph7.0pbs缓冲液以0.2～1.0mlmin?1流速进行分离纯化 收集洗脱体积处于60～80ml的洗脱液 而后在2～6℃下用3～5k的超滤管进行浓缩 浓缩后即得到从沙蜇刺丝囊毒素中分离溶血毒素蛋白。 |
| 一种从霞水母刺丝囊毒素内分离致死毒素蛋白的方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201110027667.7, 申请日期: 2011-09-07, 公开日期: 2011-09-07
发明人: 李鹏程; 李荣锋; 于华华; 冯金华; 邢荣娥; 刘松; 秦玉坤; 李克成; 孟祥涛; 崔金会
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一种从霞水母刺丝囊毒素中分离致死毒素蛋白的方法 其特征在于：1)将霞水母刺丝囊细胞加入预冷缓冲液中破碎 2)将上述步骤1)上清液于2～6℃下用缓冲液透析过夜 破碎后2～6℃离心 然后低温离心 3)将步骤2)所得上清液过滤 收集上清液 收集上清液 而后用含con?a?sepharose?4b亲和柱进行分离 4)将步骤3)得到的上清液用强阴离子交换树脂mono?q预装柱纯化分离 待用 待用 分离时采用含有0.1～0.3mα?甲基?d?甘露糖苷和0.1～0.3mnacl的ph7.4 依次采用ph7.8 浓度10～30mm的tris?hcl缓冲液进行洗脱并收集洗脱液 浓度为10～30mm的tris?hcl缓冲液和含1m?nacl的ph7.8 低温离心 浓度为10～30mm的tris?hcl缓冲液进行梯度洗脱 收集上清液 流速为0.2～0.5mlmin?1 待用 收集约25～40min洗脱液 即为从霞水母刺丝囊毒素中分离致死毒素蛋白。 |
| 一种从霞水母刺丝囊毒素内分离热激蛋白60的方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201010596892.8, 申请日期: 2011-08-17, 公开日期: 2011-08-17
发明人: 李鹏程; 李荣锋; 于华华; 冯金华; 邢荣娥; 刘松; 秦玉坤; 李克成; 孟祥涛; 崔金会
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一种从霞水母刺丝囊毒素中分离热激蛋白60的方法 其特征在于：1)将从霞水母触手中得到的霞水母刺丝囊细胞加入预冷缓冲液中破碎 2)步骤1)所得上清液即为霞水母刺丝囊细胞毒素于2?6℃下对ph7.820mm?tris?hcl缓冲液透析过夜 破碎后低温离心 然后低温离心 3)将步骤2)所得上清液过滤 收集上清液 收集上清液 而后将其上含deae?sepharosefast?flow的阴离子交换树柱进行分离 4)将步骤3)用截留分子量为3kda的超滤管浓缩的浓缩物用凝胶树脂superdex75柱纯化分离 待用 待用 首先采用ph7.820mmtris?hcl缓冲液洗脱 采用含有浓度为0.15?0.5m的nacl的ph7.820mm?tris?hcl缓冲液洗脱 而后采用含有浓度分别为0.1?2m不同浓度的nacl的ph7.820mm?tris?hcl缓冲液进行梯度洗脱 流速为0.2?0.5mlmin?1 收集各洗脱峰 收集各洗脱峰 而后用截留分子量为3kda的超滤管浓缩 其中流出体积50ml?80ml内的组分即为热激蛋白60。 待用 |
| 一种分离纯化组蛋白H4的方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN200610047932.7, 申请日期: 2008-04-02, 公开日期: 2008-04-02
发明人: 李鹏程; 李翠萍; 于华华; 刘 松; 邢荣娥; 郭占勇; 陈晓琳; 冯金华
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1、一种分离纯化组蛋白h4的方法 其特征在于包括以下步骤：(1)提取样品：将50g-150g的海蜇样品破碎 而后将其在相对离心力为9160-29700g下离心10-30min 然后加入样品重量0.5-4倍的缓冲液 取上清液备用 (2)分离纯化：①加样前样品预处理：将步骤1)得到的样品在2℃-6℃下加入到离子交换剂中 放入2℃-6℃下 每隔8-12min搅拌一次 ②将已吸附蛋白的离子交换剂注入到层析柱中 浸泡0.5-48hh 共搅拌2-6次 用3-5倍床体积的缓冲液淋洗 ③洗脱：采用含有nacl的缓冲液 而后在相对离心力为573-1467g下 以60-90ml/h的洗脱速度进行阶段性洗脱 离心5-10min 收集组分。 弃去上清液 |
