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一种对虾肠道微生物DNA的提取方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN200910263665.0, 申请日期: 2010-06-23, 公开日期: 2010-06-23
发明人:  刘淮德;  王雷;  刘梅;  王宝杰;  蒋克勇
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一种对虾肠道微生物dna的提取方法  其特征在于：1)将0.01-0.05g对虾肠道在液氮下研磨  2)将洗脱液在200g离心5-10min  并加入0.8-1.2ml?pbs、15-25μl?pvpp匀浆和200-300μl?0.5％tween-80  取上清菌液待用  沉淀中加0.8-1.2ml?pbs以200g离心取上清菌液  3)将步骤2)所得上清菌液以1200g离心5-10min  均匀后吹打洗脱3-5min  将两次离心所得上清菌液合并  收集上清菌液  合并上清液以300g离心5-10min  4)将步骤3)所得上清菌液中加100-150μlctab提取液和10-15μl溶菌酶  取上清菌液待用  放入37℃摇床  而后加15-20μl?20％(W/c)Sds和10-15μl蛋白酶k  振荡30-40min  60-70℃水浴1-2h  5)将水浴后菌液在4℃?3200g离心8-15min  取上清菌液  6)将水浴后菌液以3200g离心8-15min  而后加100-150μl?ctab液和20-25μl?20％sds混匀后  取上清菌液  7)将步骤6)所得上清菌液中加上清菌液体积0.6-0.8倍的异丙醇  涡旋  而后加入与上述上清菌液等体积的酚/氯仿混合液  而后于-20℃静置1-2h  8)将步骤7)所得沉淀中加入600-800μl?70％预冷乙醇  60-70℃水浴10-15min  14000g离心10-15min  再以4℃?14000g离心10-15min  14000g离心10-15min  取上清菌液待用  所得沉淀待用  所得沉淀即为对虾肠道微生物dna。  
不同性状海带配子体的鉴定方法及可采用的部分DNA序列 专利
专利类型: 发明, 专利号: ZL200310105037.2, 申请日期: 2008-07-30, 公开日期: 2011-07-15
发明人:  段德麟;  胡自民;  赫英俊
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经济海藻紫菜种质资源鉴定的方法及部分DNA序列 专利
专利类型: 发明, 专利号: ZL200310105036.8, 申请日期: 2008-07-30, 公开日期: 2011-07-15
发明人:  段德麟;  胡自民;  赫英俊
Adobe PDF(997Kb)  |  收藏  |  浏览/下载：209/0  |  提交时间：2011/07/15
龙须菜选育品系和野生型及相关种鉴定的方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN200410021012.9, 申请日期: 2005-07-20, 公开日期: 2005-07-20
发明人:  段德麟;  李文红;  胡自民
Adobe PDF(1224Kb)  |  收藏  |  浏览/下载：305/0  |  提交时间：2014/08/04
1.龙须菜选育品系和野生型及相关种鉴定的方法  其特征在于：龙须菜的rdnaits全序列的获取  提取缓冲液的组成为：100mmoll-1tris.hcl  步骤如下：(1)总dna提取：取新鲜健康的藻体材料  Ph8.0  (2)Pcr扩增：龙须菜its区扩增的特异引物p1、p2的序列分别为：p1：5’gggatccgtttccgtaggtgaacctgc3’  用无菌水处理后  50-100mmoll-1edta  位于18s上  P2：5’gggatccatatgcttaagttcagcgggt3’  (3)Pcr产物纯化  在液氮种研磨成粉末  0.2-0.5mnacl  位于26s上  利用该引物对步骤(1)提取的dna为模板  提取总dna  5％β-巯基乙醇  对总dna进行pcr扩增反应  0.2％pvp-40  (4)Dna序列测定：纯化后的dna进行序列测定  1.0-2.5％sds  确立rdnaits区  (5)Dna序列数据分析：待分析的rdnaits区的序列一经测定  提取所用的kac浓度为4.0-5.0m  包括its1和5.8s区的全序列  用对位排列软件clustalw进行对位排列  建立用于鉴别龙须菜种内和种间差异的rapd和issr特异指纹图谱  Ph值范围在5.2-7.5  并辅以人工校对  步骤如下：1)总dna提取  2)Rapd和issr引物的合成  用系统进化分析各样品dna序列与数据库中各个序列间的差异  从大量随机引物中筛选出能稳定的扩增出特征条带的引物  3)根据扩增条带的多态性  构建龙须菜选育品系及野生型和相关种的rapd和issr特异指纹图谱。