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一种对虾肠道微生物DNA的提取方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN200910263665.0, 申请日期: 2010-06-23, 公开日期: 2010-06-23
发明人:  刘淮德;  王雷;  刘梅;  王宝杰;  蒋克勇
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一种对虾肠道微生物dna的提取方法  其特征在于：1)将0.01-0.05g对虾肠道在液氮下研磨  2)将洗脱液在200g离心5-10min  并加入0.8-1.2ml?pbs、15-25μl?pvpp匀浆和200-300μl?0.5％tween-80  取上清菌液待用  沉淀中加0.8-1.2ml?pbs以200g离心取上清菌液  3)将步骤2)所得上清菌液以1200g离心5-10min  均匀后吹打洗脱3-5min  将两次离心所得上清菌液合并  收集上清菌液  合并上清液以300g离心5-10min  4)将步骤3)所得上清菌液中加100-150μlctab提取液和10-15μl溶菌酶  取上清菌液待用  放入37℃摇床  而后加15-20μl?20％(W/c)Sds和10-15μl蛋白酶k  振荡30-40min  60-70℃水浴1-2h  5)将水浴后菌液在4℃?3200g离心8-15min  取上清菌液  6)将水浴后菌液以3200g离心8-15min  而后加100-150μl?ctab液和20-25μl?20％sds混匀后  取上清菌液  7)将步骤6)所得上清菌液中加上清菌液体积0.6-0.8倍的异丙醇  涡旋  而后加入与上述上清菌液等体积的酚/氯仿混合液  而后于-20℃静置1-2h  8)将步骤7)所得沉淀中加入600-800μl?70％预冷乙醇  60-70℃水浴10-15min  14000g离心10-15min  再以4℃?14000g离心10-15min  14000g离心10-15min  取上清菌液待用  所得沉淀待用  所得沉淀即为对虾肠道微生物dna。