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一种对虾肠道微生物DNA的提取方法
刘淮德; 王雷; 刘梅; 王宝杰; 蒋克勇
2010-06-23
专利权人中国科学院海洋研究所.
公开日期2010-06-23
专利类型发明
摘要本发明属于微生物学和分子生态学领域,具体涉及一种对虾肠道微生物DNA的提取方法。具体为过程采用液氮研磨,机械力破壁,溶菌酶,SDS裂解液裂解细胞,然后经分离、析出得到DNA沉淀,最后用TE溶解得到质量较好的DNA。本发明得到的产物DNA片段大于20Kb,可进行基因扩增和测序。本发明通用性好,适用于各种甲壳类水产动物肠道微生物DNA提取,仅一次提取即得到高质量的模板DNA,不需要重复实验,所获得的DNA可用于分子生态学、系统进化等研究。
关键词一种对虾肠道微生物dna的提取方法 其特征在于:1)将0.01-0.05g对虾肠道在液氮下研磨 2)将洗脱液在200g离心5-10min 并加入0.8-1.2ml?pbs、15-25μl?pvpp匀浆和200-300μl?0.5%tween-80 取上清菌液待用 沉淀中加0.8-1.2ml?pbs以200g离心取上清菌液 3)将步骤2)所得上清菌液以1200g离心5-10min 均匀后吹打洗脱3-5min 将两次离心所得上清菌液合并 收集上清菌液 合并上清液以300g离心5-10min 4)将步骤3)所得上清菌液中加100-150μlctab提取液和10-15μl溶菌酶 取上清菌液待用 放入37℃摇床 而后加15-20μl?20%(W/c)Sds和10-15μl蛋白酶k 振荡30-40min 60-70℃水浴1-2h 5)将水浴后菌液在4℃?3200g离心8-15min 取上清菌液 6)将水浴后菌液以3200g离心8-15min 而后加100-150μl?ctab液和20-25μl?20%sds混匀后 取上清菌液 7)将步骤6)所得上清菌液中加上清菌液体积0.6-0.8倍的异丙醇 涡旋 而后加入与上述上清菌液等体积的酚/氯仿混合液 而后于-20℃静置1-2h 8)将步骤7)所得沉淀中加入600-800μl?70%预冷乙醇 60-70℃水浴10-15min 14000g离心10-15min 再以4℃?14000g离心10-15min 14000g离心10-15min 取上清菌液待用 所得沉淀待用 所得沉淀即为对虾肠道微生物dna。
申请日期2009-12-18
专利号CN200910263665.0
语种中文
专利状态公开
申请号CN200910263665.0
文献类型专利
条目标识符http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/17153
专题海洋生物技术研发中心
推荐引用方式
GB/T 7714
刘淮德,王雷,刘梅,等. 一种对虾肠道微生物DNA的提取方法. CN200910263665.0[P]. 2010-06-23.
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