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龙须菜选育品系和野生型及相关种鉴定的方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN200410021012.9, 申请日期: 2005-07-20, 公开日期: 2005-07-20
发明人:  段德麟;  李文红;  胡自民
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1.龙须菜选育品系和野生型及相关种鉴定的方法  其特征在于：龙须菜的rdnaits全序列的获取  提取缓冲液的组成为：100mmoll-1tris.hcl  步骤如下：(1)总dna提取：取新鲜健康的藻体材料  Ph8.0  (2)Pcr扩增：龙须菜its区扩增的特异引物p1、p2的序列分别为：p1：5’gggatccgtttccgtaggtgaacctgc3’  用无菌水处理后  50-100mmoll-1edta  位于18s上  P2：5’gggatccatatgcttaagttcagcgggt3’  (3)Pcr产物纯化  在液氮种研磨成粉末  0.2-0.5mnacl  位于26s上  利用该引物对步骤(1)提取的dna为模板  提取总dna  5％β-巯基乙醇  对总dna进行pcr扩增反应  0.2％pvp-40  (4)Dna序列测定：纯化后的dna进行序列测定  1.0-2.5％sds  确立rdnaits区  (5)Dna序列数据分析：待分析的rdnaits区的序列一经测定  提取所用的kac浓度为4.0-5.0m  包括its1和5.8s区的全序列  用对位排列软件clustalw进行对位排列  建立用于鉴别龙须菜种内和种间差异的rapd和issr特异指纹图谱  Ph值范围在5.2-7.5  并辅以人工校对  步骤如下：1)总dna提取  2)Rapd和issr引物的合成  用系统进化分析各样品dna序列与数据库中各个序列间的差异  从大量随机引物中筛选出能稳定的扩增出特征条带的引物  3)根据扩增条带的多态性  构建龙须菜选育品系及野生型和相关种的rapd和issr特异指纹图谱。