龙须菜选育品系和野生型及相关种鉴定的方法

IOCAS-IR > 实验海洋生物学重点实验室

	龙须菜选育品系和野生型及相关种鉴定的方法
	段德麟; 李文红; 胡自民
	2005-07-20
专利权人	中国科学院海洋研究所.
公开日期	2005-07-20
专利类型	发明
摘要	本发明涉及对中国沿海经济海藻龙须菜选育品系及野生型和相关种进行鉴定的方法，即龙须菜rDNA ITS区ITS1和5.8S整个序列的确定，及RAPD与ISSR种内和种间特异指纹图谱的建立。ITS区DNA序列获得的步骤为：1)总DNA提取；2)以上步得到的DNA为模板，进行PCR扩增反应；3)PCR产物纯化；4)对纯化后的DNA进行测序；5)用对位排软件进行对位排列，并辅以人工校对，结合Genbank中已经注册的部分龙须菜的ITS序列确定ITS的起始位点，用系统进化软件分析序列差异并对龙须菜进行鉴定。RAPD和ISSR指纹图谱建立的步骤为：1)总DNA提取；2)RAPD和ISSR引物的筛选；3)特异引物扩增及建立RAPD和ISSR种内和种间差异的指纹图谱。结合三种检测方法，完全可以对中国沿海经济海藻龙须菜选育品系及野生型和相关种进行鉴定。
关键词	1.龙须菜选育品系和野生型及相关种鉴定的方法其特征在于：龙须菜的rdnaits全序列的获取提取缓冲液的组成为：100mmoll-1tris.hcl 步骤如下：(1)总dna提取：取新鲜健康的藻体材料 Ph8.0 (2)Pcr扩增：龙须菜its区扩增的特异引物p1、p2的序列分别为：p1：5’gggatccgtttccgtaggtgaacctgc3’ 用无菌水处理后 50-100mmoll-1edta 位于18s上 P2：5’gggatccatatgcttaagttcagcgggt3’ (3)Pcr产物纯化在液氮种研磨成粉末 0.2-0.5mnacl 位于26s上利用该引物对步骤(1)提取的dna为模板提取总dna 5％β-巯基乙醇对总dna进行pcr扩增反应 0.2％pvp-40 (4)Dna序列测定：纯化后的dna进行序列测定 1.0-2.5％sds 确立rdnaits区 (5)Dna序列数据分析：待分析的rdnaits区的序列一经测定提取所用的kac浓度为4.0-5.0m 包括its1和5.8s区的全序列用对位排列软件clustalw进行对位排列建立用于鉴别龙须菜种内和种间差异的rapd和issr特异指纹图谱 Ph值范围在5.2-7.5 并辅以人工校对步骤如下：1)总dna提取 2)Rapd和issr引物的合成用系统进化分析各样品dna序列与数据库中各个序列间的差异从大量随机引物中筛选出能稳定的扩增出特征条带的引物 3)根据扩增条带的多态性构建龙须菜选育品系及野生型和相关种的rapd和issr特异指纹图谱。
申请日期	2004-01-07
专利号	CN200410021012.9
语种	中文
专利状态	公开
申请号	CN200410021012.9
文献类型	专利
条目标识符	http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/17416
专题	实验海洋生物学重点实验室
推荐引用方式 GB/T 7714	段德麟,李文红,胡自民. 龙须菜选育品系和野生型及相关种鉴定的方法. CN200410021012.9[P]. 2005-07-20.

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龙须菜选育品系和野生型及相关种鉴定的方法（1224KB）			限制开放	CC BY-NC-SA	浏览