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进行凡纳滨对虾家系鉴定的多重微卫星鉴定体系及应用 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201310340730.1, 申请日期: 2013-12-25, 公开日期: 2013-12-25
发明人:  于洋;  李富花;  张晓军;  相建海
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进行凡纳滨对虾家系鉴定的多重微卫星鉴定体系  包括多重微卫星引物体系  其特征在于:使用多态性高的lvm1‑lvm15共15对微卫星引物构成两个多重微卫星引物体系  所述的两个多重微卫星引物体系如下:1)多重微卫星引物体系1的引物序列和荧光标记组合为:lvm1f:6‑fam(羧基荧光素)‑5’‑gatgacctgcctttctctgc‑3’lvm1r:5’‑gggagagatgatgggaagaag‑3’lvm2f:Rox(羧基x罗丹明)‑5’‑atggcacaaataggatcttg‑3’lvm2r:5’‑gactggaagagcactgattc‑3’lvm3f:Hex(六氯荧光素)‑5’‑atacgaaacaccccatccc‑3’lvm3r:5’‑gtggtcttacctcgtggctc‑3’lvm4f:Tamra(羧基四甲基罗丹明)‑5’‑agcacctagcacttgctgaac‑3’lvm4r:5’‑agagactcacatcctcatcctc‑3’lvm5f:6‑fam(羧基荧光素)‑5’‑cattgaaaacggaatcctcg‑3’lvm5r:5’‑gatattcccatcaacacagcg‑3’lvm6f:Rox(羧基x罗丹明)‑5’‑caccaaaacgaacgaaacg‑3’lvm6r:5’‑ggataaaaacgaattgtataccg‑3’lvm7f:Hex(六氯荧光素)‑5’‑gagagcaaataagaaagggc‑3’lvm7r:5’‑aggatgcaaatgataacgag‑3’lvm8f:Tamra(羧基四甲基罗丹明)‑5’‑ggcacactgtttagtcctcg‑3’lvm8r:5’‑cgaacagaatggcagaggag‑3’lvm9f:6‑fam(羧基荧光素)‑5’‑cccgacttggcttttagttg‑3’lvm9r:5’‑gagattgctatcctcggctg‑3’lvm10f:Rox(羧基x罗丹明)‑5’‑gatcctgcgagtcactttatctc‑3’lvm10r:5’‑tttattgcgtatcccagaagc‑3’2)多重微卫星引物体系2的引物和荧光标记组合如下:lvm11f:6‑fam(羧基荧光素)‑5’‑ccgccatcatcatcaaca‑3’lvm11r:5’‑tcattcgggttcgagactc‑3’lvm12f:Rox(羧基x罗丹明)‑5’‑gatcattcgcccctcttttt‑3’lvm12r:5’‑atctacggttcgagagcaga‑3’lvm13f:Hex(六氯荧光素)‑5’‑ggactcacacttctggttc‑3’lvm13r:5’‑ggctgcaccttgtaagtc‑3’lvm14f:Tamra(羧基四甲基罗丹明)‑5’‑tatgctcgttccctttgctt‑3’lvm14r:5’‑ttgaaggaaaagtgttgggg‑3’lvm15f:6‑fam(羧基荧光素)‑5’‑actagtggatctgtctattcat‑3’lvm15r:5’‑atacccacccatgcatgtta‑3’。  
一种中华绒螯蟹三倍体诱导新方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201310235286.7, 申请日期: 2013-10-09, 公开日期: 2013-10-09
发明人:  张成松;  相建海;  李富花;  崔朝霞;  万建军
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一种中华绒螯蟹三倍体诱导新方法  (3)基于形态学标记的药物诱导起始时刻的确定:将受精膜举起作为诱导起始时刻的形态学标记  其特征在于:所述方法具体如下:(1)亲蟹的海水驯化:将亲蟹生活的盐度从0提高到18‰  (2)亲蟹标记:将有编码的塑料标签绑缚在雌蟹上  (4)kcl诱导最优参数的确定及应用:通过实验确定kcl诱导中华绒螯蟹三倍体的有效浓度及处理持续时间并加以应用  并在此盐度驯化后开始交配产卵  以标记区分亲蟹个体  (5)药物渗透性增加措施:增加药物与受精卵接触面积  以利于诱导药物的渗透。  
一种稳定提高中华绒螯蟹多倍体诱导效率的便利设施 专利
专利类型: 实用新型, 专利号: CN201320014475.7, 申请日期: 2013-07-31, 公开日期: 2013-07-31
发明人:  张成松;  相建海;  李富花;  崔朝霞;  万建军
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所述产卵箱内设置有若干隔开的产卵小室  一种稳定提高中华绒螯蟹多倍体诱导效率的便利设施  用于中华绒螯蟹繁殖行为的实时监控  所述图像采集系统用于实时监控中华绒螯蟹的繁殖行为。  其特征在于  所述水循环系统设置于其中一个所述产卵小室内  包括产卵箱、水循环系统以及图像采集系统  完成所述产卵箱内水的循环流动  
文昌鱼胚胎仔稚幼鱼循环水人工控制孵育系统 专利
专利类型: 实用新型, 专利号: CN201220662997.3, 申请日期: 2013-05-22, 公开日期: 2013-05-22
发明人:  谭训刚;  孙威;  徐永立;  张培军;  尤锋
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一种文昌鱼胚胎仔稚幼鱼循环水人工控制孵育系统  其特征在于:包括框架结构(4)、孵育容器(3)、恒温控制系统  其中框架结构(4)上设有多个孵育容器(3)  各孵育容器(3)均与恒温控制系统连接  通过恒温控制系统使孵育容器(3)内的胚胎仔或稚幼鱼生存在恒温环境中。  
一种累代选育对虾新品种的鉴定方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201210384634.2, 申请日期: 2013-01-23, 公开日期: 2013-01-23
发明人:  相建海;  于洋;  张晓军;  李富花
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一种对累代选育对虾新品种的鉴定方法  其特征在于:采用线粒体控制区的引物扩增并测序待鉴定群体的线粒体控制区  将扩增所得线粒体控制区序列符合累代选育群体单倍型的待鉴定群体再利用5对微卫星位点引物进行扩增  所述5对微卫星位点引物为:引物名序列引物名序列khv1f5’?ttaccgcctaagagcgaatg?3’khv1r5’?tgtcctttcgtaccagtcaag?3’khv2f5’?gatgtacacaactgtacttcg?3’khv2r5’?gagatgataagagaacgaaag?3’khv3f5’?gagagcaaataagaaagggc?3’khv3r5’?aggatgcaaatgataacgag?3’khv4f5’?cgaagagatttatccaggg?3’khv4r5’?cgtgcattattatcctttcc?3’khv5f5’?atgctgcatcatctctgac?3’khv5r5’?aggaaaagacggtgaaatag?3’  将扩增所的产物进行微卫星分型  而后利用微卫星分型数据进行判别分析  进而得到累代选育对虾新品种  
一种凡纳滨对虾热休克蛋白基因启动子 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201110341708.X, 申请日期: 2012-10-31, 公开日期: 2012-10-31
发明人:  相建海;  赵翠;  郇聘;  张晓军;  李富花
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(2)与序列表中seq?id?no.1限定的dna序列具有80%以上同源性的dna序列  一种凡纳滨对虾热休克蛋白基因启动子  其特征在于:凡纳滨对虾热休克蛋白基因启动子为下述任一项:(1)凡纳滨对虾热休克蛋白基因启动子为序列表中seq?id?no.1碱基序列  (3)是seq?id?no.1的片段、遗传变体或缺失体  且能够控制下游基因转录的dna分子。  
一种栉孔扇贝热休克蛋白基因启动子 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201110334969.9, 申请日期: 2012-10-31, 公开日期: 2012-10-31
发明人:  相建海;  赵翠;  郇聘;  张晓军;  李富花
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(2)与序列表中seq?id?no.1限定的dna序列具有80%以上同源性的dna序列  一种栉孔扇贝热休克蛋白基因启动子  其特征在于:栉孔扇贝热休克蛋白基因启动子为下述任一项:(1)栉孔扇贝热休克蛋白基因启动子为序列表中seq?id?no.1碱基序列  (3)是序列表中seq?id?no.1的片段、遗传变体或缺失体  且能控制下游基因转录的dna分子。  
一种检测荧光原位杂交质量控制的方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201110341817.1, 申请日期: 2012-05-02, 公开日期: 2012-05-02
发明人:  郇聘;  张晓军;  赵翠;  李富花;  相建海
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一种荧光原位杂交过程的质量控制方法  其特征在于:载玻片经多聚赖氨酸处理后  设置不同的dna样品区  将不同dna样品溶液分别加到其上  风干后经紫外交联仪照射  使dna结合到玻片上  得到简化的染色体片  而后进行免疫检测  通过不同区域信号的反应得出荧光原位杂交过程的质量反馈。  
一种BAC DNA指纹分析的标记方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201010280134.5, 申请日期: 2012-04-04, 公开日期: 2012-04-04
发明人:  相建海;  张晓军;  郇聘;  赵翠;  李富花;  王兵
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一种bac?dna指纹分析的标记方法  其特征在于:1)将bac?dna样品采用限制性内切酶进行酶切  2)采用一种荧光标记的dutp和taq?dna聚合酶对酶切后的bac?dna片段进行标记  得酶切的bac?dna片段  然后即可用于abi测序仪上进行dna片段分析。  
一种提取单个鱼卵仔鱼微量总DNA的简便快速方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201110027643.1, 申请日期: 2011-08-24, 公开日期: 2011-08-24
发明人:  尤锋;  吴志昊;  王伟;  徐冬冬;  张毅;  张培军;  徐永立
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1尾仔鱼/0.05?0.5ml无水乙醇  一种提取单个鱼卵仔鱼微量总dna的简便快速方法  其特征在于:1)样品固定:采集鱼卵或仔鱼  滤去水后立即加入无水乙醇  2)样品中固定液的去除:取步骤1)所得已固定的单个鱼卵或仔鱼样品  而后于?20℃或室温保存备用  加入生理盐水洗涤  3)样品消化:取上述洗涤过的单个鱼卵或仔鱼  鱼卵或仔鱼与无水乙醇比例为:1ml鱼卵/2?5ml无水乙醇  1000?2000g离心20?60秒去除多余生理盐水  加入100?300μl?dna提取缓冲液和10?30μl细胞裂解缓冲液  4)提取总dna:将步骤3)消化至澄清的溶液中加入100?300μl?5?6mol/l?nacl溶液  再用滤纸吸干样品  使细胞破壁  震荡20?30秒。15000g离心30分钟  重复2?3次  而后将细胞破壁的单个鱼卵或仔鱼加入10?100μg蛋白酶k和10?100μg?rna酶  吸取上清液使蛋白质去除  震荡混匀  然后在上清液中加入等体积异丙醇  于50?70℃温育  轻轻混匀  每10?20分钟颠倒混匀一次  ?20℃静置1?2小时  消化至溶液澄清  15000g离心15分钟  待用  沉淀即得到单个鱼卵仔鱼微量总dna。