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| 进行凡纳滨对虾家系鉴定的多重微卫星鉴定体系及应用 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201310340730.1, 申请日期: 2013-12-25, 公开日期: 2013-12-25
发明人: 于洋 ; 李富花; 张晓军; 相建海
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进行凡纳滨对虾家系鉴定的多重微卫星鉴定体系 包括多重微卫星引物体系 其特征在于：使用多态性高的lvm1‑lvm15共15对微卫星引物构成两个多重微卫星引物体系 所述的两个多重微卫星引物体系如下：1）多重微卫星引物体系1的引物序列和荧光标记组合为：lvm1f:6‑fam（羧基荧光素）‑5’‑gatgacctgcctttctctgc‑3’lvm1r:5’‑gggagagatgatgggaagaag‑3’lvm2f:Rox（羧基x罗丹明）‑5’‑atggcacaaataggatcttg‑3’lvm2r:5’‑gactggaagagcactgattc‑3’lvm3f:Hex(六氯荧光素)‑5’‑atacgaaacaccccatccc‑3’lvm3r:5’‑gtggtcttacctcgtggctc‑3’lvm4f:Tamra(羧基四甲基罗丹明)‑5’‑agcacctagcacttgctgaac‑3’lvm4r:5’‑agagactcacatcctcatcctc‑3’lvm5f:6‑fam（羧基荧光素）‑5’‑cattgaaaacggaatcctcg‑3’lvm5r:5’‑gatattcccatcaacacagcg‑3’lvm6f:Rox（羧基x罗丹明）‑5’‑caccaaaacgaacgaaacg‑3’lvm6r:5’‑ggataaaaacgaattgtataccg‑3’lvm7f:Hex(六氯荧光素)‑5’‑gagagcaaataagaaagggc‑3’lvm7r:5’‑aggatgcaaatgataacgag‑3’lvm8f:Tamra(羧基四甲基罗丹明)‑5’‑ggcacactgtttagtcctcg‑3’lvm8r:5’‑cgaacagaatggcagaggag‑3’lvm9f:6‑fam（羧基荧光素）‑5’‑cccgacttggcttttagttg‑3’lvm9r:5’‑gagattgctatcctcggctg‑3’lvm10f:Rox（羧基x罗丹明）‑5’‑gatcctgcgagtcactttatctc‑3’lvm10r:5’‑tttattgcgtatcccagaagc‑3’2）多重微卫星引物体系2的引物和荧光标记组合如下：lvm11f:6‑fam（羧基荧光素）‑5’‑ccgccatcatcatcaaca‑3’lvm11r:5’‑tcattcgggttcgagactc‑3’lvm12f:Rox（羧基x罗丹明）‑5’‑gatcattcgcccctcttttt‑3’lvm12r:5’‑atctacggttcgagagcaga‑3’lvm13f:Hex(六氯荧光素)‑5’‑ggactcacacttctggttc‑3’lvm13r:5’‑ggctgcaccttgtaagtc‑3’lvm14f:Tamra(羧基四甲基罗丹明)‑5’‑tatgctcgttccctttgctt‑3’lvm14r:5’‑ttgaaggaaaagtgttgggg‑3’lvm15f:6‑fam（羧基荧光素）‑5’‑actagtggatctgtctattcat‑3’lvm15r:5’‑atacccacccatgcatgtta‑3’。 |
| 一种夏鲆精子便捷式超低温冷冻方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201310214338.2, 申请日期: 2013-09-25, 公开日期: 2013-09-25
发明人: 刘清华; 李军; 王文琪; 徐世宏; 韩龙江
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一种夏鲆精子便捷式超低温冷冻方法 其特征在于：1）冷冻保存：将活力高于85%的夏鲆精子与抗冻液以1:3‑1:2的体积比混合 2）解冻：将上述冻存冻精于亲鱼车间的循环水中即可解冻 混合后置于容器内再一并移入液氮罐内进行一步预冷 待冻精由固态融化为液态置于0‑4℃冰箱中保存备用。 两步冷冻 而后投入液氮中进行长期保存 |
| 一种星斑川鲽精子超低温冷冻保存方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201310213169.0, 申请日期: 2013-09-25, 公开日期: 2013-09-25
发明人: 刘清华; 李军; 徐世宏; 韩龙江
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一种星斑川鲽精子超低温冷冻保存方法 所述抗冻液由稀释液、抗冻剂和添加剂组成 其特征在于：将星斑川鲽的精液与抗冻液按体积比1:3的比例混合 处理后投入到液氮（‑196℃） 在0℃孵育6‑8分钟 分装保存 抗冻剂为终浓度8%的（v/v）dmso（二甲基亚砜）和终浓度7%的（v/v）gly（甘油） 孵育后以分段方式降温处理 其中 稀释液为100mm蔗糖 100mm khco3 添加剂：5mm还原型谷胱甘肽 25mm nahco3 50mm牛磺酸 10%蛋黄（v/v）。 |
| 太平洋鳕鱼精子高效超低温冷冻保存方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201310214264.2, 申请日期: 2013-09-25, 公开日期: 2013-09-25
发明人: 刘清华; 李军; 于道德; 官曙光
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孵育后以分段方式降温处理 一种太平洋鳕鱼精子高效超低温冷冻保存方法 其特征在于：将太平洋鳕鱼精液与抗冻液以1:4‑1:3的体积比例混合 混合后在0‑4℃孵育平衡8‑10分钟 处理后投入到液氮（‑196℃） 抗冻剂为终浓度10%（v/v）的丙二醇（pg） 分装保存 所述抗冻液由稀释液、抗冻剂、添加剂组成 添加剂为：终浓度5%（v/v）的蛋黄和终浓度5%bsa（v/v）。 其中稀释液为：nacl 8g/l Na2hpo4·2h2o0.6g/l Kh2po40.6g/l 海藻糖37.8g/l |
| 一种适用于文蛤家系鉴定的微卫星标记方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201210112325.X, 申请日期: 2012-10-10, 公开日期: 2012-10-10
发明人: 卢霞; 王鸿霞; 刘保忠
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一种适用于文蛤家系鉴定的微卫星标记方法 gc含量为40％?60％ 包括微卫星位点来源、引物设计、引物优化和微卫星标记家系鉴定体系 2)引物设计：在微卫星重复的侧翼序列利用软件primer?premier?5.0设计引物 退火温度为45?65℃ 其特征在于：1)微卫星位点的来源：提取文蛤的基因组dna利用提取的dna 引物设计条件为：引物长度为19?25mer 预期pcr产物长度为100?400bp 采用限制性内切酶法获得文蛤基因组dna片段 并构建微卫星磁珠富集文库 检测阳性克隆 3)引物优化：根据不同引物的tm值进行温度梯度优化 经测序得到含有微卫星重复的dna序列 在tm值上下各10℃ 4)微卫星标记家系鉴定体系的确立：微卫星位点的多态性水平可用信息含量值(Pic)衡量 温度梯度优化扩增得到的pcr产物用8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳?eb染色系统进行检测 根据上述优化获得的ta值 选取杂带较少、特异性产物亮度较高的pcr反应对应的温度为该引物的最佳退火温度ta 选取多个体作为群体进行计算微卫星位点的多态性水平可用信息含量值(Pic)进而衡量多态性信息 根据pic值 Pic小于0.25的标记 筛选得到重复性好、稳定性好 Pic值大于0.25的位点 作为文蛤微卫星标记家系鉴定体系 用于文蛤的家系区分与个体识别。 |
| 一种三疣梭子蟹快速生长品系的构建方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN200810160014.4, 申请日期: 2010-06-16, 公开日期: 2010-06-16
发明人: 崔朝霞; 谭烽; 王春琳; 吴丹华; 栾维莎
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一种三疣梭子蟹快速生长品系的构建方法 其特征在于：利用选育材料的基因组微卫星作为分子标记 根据分子标记得到遗传结构中存在生殖隔离明显的群体作为杂交群体 杂交群体进行杂交组合 即得三疣梭子蟹快速生长品系。 |
| 一种三疣梭子蟹抗病品系的构建方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN200810138161.1, 申请日期: 2010-01-06, 公开日期: 2010-01-06
发明人: 崔朝霞; 李喜莲; 刘媛; 王鸿霞
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1.一种三疣梭子蟹抗病品系的构建方法 其特征在于：以选育材料的线粒体控制区序列的信息作为分子标记 首先将基础群体行群体选育所得群体与家系选育的补充材料进行家系选育 根据分子标记得到遗传变异丰富的群体作为群体选育的基础群体 而后将家系选育所得抗病性状稳定的群体之间进行家系间杂交组合 同时得到以遗传上相互独立的群体作为家系选育的补充材料 所得抗病性状稳定的家系即为抗病品系 其中每一步骤选育材料均为经感染源浸泡感染后半致死浓度存活的个体。 |
| 一种中华绒螯蟹多元高通量遗传标记系统及遗传分析方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN200910020751.9, 申请日期: 2009-12-30, 公开日期: 2009-12-30
发明人: 崔朝霞; 王鸿霞; 吴丹华; 刘 媛; 李倩倩
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1.一种中华绒螯蟹多元高通量遗传标记系统 R：caccagaaataatgaggttt) 其特征在于：所述多元高通量遗传标记系统为线粒体序列信息系统和微卫星分子标记系统 系统1由7个est-ssr标记组成 Ne12(F：atgacattgatgcctgacg 其中微卫星分子标记系统为由7个est-ssr标记的系统1和6个est-ssr标记的系统2组成 扩增7个est-ssr标记的7对引物分别是ne5(F：cgtgaatgctgtagtgtaat R：tgcctttattgaccgagac) Ne16(F：tttcacatcctccacagaca R：gccacaagtacacccaatca) Ne27(F：acgggaaatggaacagat R：tccttccatcctgagtcc) Ne46(F：actgctgttgttggtggtc R：ccttaatccgttgcgtca) Ne48(F：aaaggtcagttaatttcttgat R：tctagtgaaatgacatattggt) Ne49(F：agaccgctgttatgctcct R：atgggaatgaaggttatgtatg) R：cagagccacaacactaacg) 系统2由6个est-ssr标记组成 Ne18(F：tattcaacatttcaacaacgat 扩增6个est-ssr标记的6对引物分别是ne1(F：cattccaagtcttgacccc R：gacgagcgaagaactgga) Ne23(F：agaggcaaatgcgataaaga R：cacgacagacttaccagcac) Ne25(F：aggaggtgcgtaagagtga R：tttccttccatcctgagtc) Ne26(F：acgggaaatggaacagat R：tccttccatcctgagtcc) Ne36(F：atgtggactgcgggaga R：gtggtggtaggttcgtctgt)。 |
| 一种三疣梭子蟹多元高通量遗传标记系统及遗传分析方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN200910015428.2, 申请日期: 2009-10-28, 公开日期: 2009-10-28
发明人: 崔朝霞; 王鸿霞; 谭 烽; 刘 媛; 吴丹华
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1.一种三疣梭子蟹多元高通量遗传标记系统 R：gtcttccactcccttactgt) 其特征在于：所述多元高通量遗传标记系统为线粒体序列信息系统和微卫星分子标记系统 系统1由7个ssr标记组成 P04(F：gccactatcttgctgaggttga 其中微卫星分子标记系统为由7个ssr标记的系统1和6个ssr标记的系统2组成 扩增7个ssr标记的7对引物分别是e13(F：aaggaggaggctttgatatg R：gccatagcacgaacacttttga) E20(F：cctcagggcagctctggat R：cccggactaggtgacaggtt) E24(F：aactatgggtcctgagtatta R：ctcggtttctgtccactt) C13(F：ctgtctgatgagtgaggctac R：tgaccacgaggaaaggag) C31(F：tataagggcttaagtgtacg R：gatctaaactcaaggcaaaa) H4(F：aatcacttcactacacctttt R：cttgatgggtggcagtct) R：acaagatccttcgtggtggg) 系统2由6个ssr标记组成 E18(F：ccacaactgcaaacacct 扩增6个ssr标记的6对引物分别是e9(F：tactgagacgccgctggtta R：ttggcattttcatcacttac) E28(F：cgttactgaaagagtggtgaa R：gcagaggttgtaccaccg) C14(F：agtgagattaacgcaact R：catctttcattacaggga) H13(F：atgggcaagcctcttaatgt R：ggatcttcgggtaggactga) E17(F：ataaatatcttggaagccctca R：acgccacatagaacactcactc)。 |
| 一种栉孔扇贝的判性系及制备方法和应用 专利
专利类型: 发明, 专利号: ZL200410020959.8, 申请日期: 2008-04-23, 公开日期: 2011-07-15
发明人: 刘晓; 张国范
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