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进行凡纳滨对虾家系鉴定的多重微卫星鉴定体系及应用 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201310340730.1, 申请日期: 2013-12-25, 公开日期: 2013-12-25
发明人:  于洋;  李富花;  张晓军;  相建海
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进行凡纳滨对虾家系鉴定的多重微卫星鉴定体系  包括多重微卫星引物体系  其特征在于：使用多态性高的lvm1‑lvm15共15对微卫星引物构成两个多重微卫星引物体系  所述的两个多重微卫星引物体系如下：1）多重微卫星引物体系1的引物序列和荧光标记组合为：lvm1f:6‑fam（羧基荧光素）‑5’‑gatgacctgcctttctctgc‑3’lvm1r:5’‑gggagagatgatgggaagaag‑3’lvm2f:Rox（羧基x罗丹明）‑5’‑atggcacaaataggatcttg‑3’lvm2r:5’‑gactggaagagcactgattc‑3’lvm3f:Hex(六氯荧光素)‑5’‑atacgaaacaccccatccc‑3’lvm3r:5’‑gtggtcttacctcgtggctc‑3’lvm4f:Tamra(羧基四甲基罗丹明)‑5’‑agcacctagcacttgctgaac‑3’lvm4r:5’‑agagactcacatcctcatcctc‑3’lvm5f:6‑fam（羧基荧光素）‑5’‑cattgaaaacggaatcctcg‑3’lvm5r:5’‑gatattcccatcaacacagcg‑3’lvm6f:Rox（羧基x罗丹明）‑5’‑caccaaaacgaacgaaacg‑3’lvm6r:5’‑ggataaaaacgaattgtataccg‑3’lvm7f:Hex(六氯荧光素)‑5’‑gagagcaaataagaaagggc‑3’lvm7r:5’‑aggatgcaaatgataacgag‑3’lvm8f:Tamra(羧基四甲基罗丹明)‑5’‑ggcacactgtttagtcctcg‑3’lvm8r:5’‑cgaacagaatggcagaggag‑3’lvm9f:6‑fam（羧基荧光素）‑5’‑cccgacttggcttttagttg‑3’lvm9r:5’‑gagattgctatcctcggctg‑3’lvm10f:Rox（羧基x罗丹明）‑5’‑gatcctgcgagtcactttatctc‑3’lvm10r:5’‑tttattgcgtatcccagaagc‑3’2）多重微卫星引物体系2的引物和荧光标记组合如下：lvm11f:6‑fam（羧基荧光素）‑5’‑ccgccatcatcatcaaca‑3’lvm11r:5’‑tcattcgggttcgagactc‑3’lvm12f:Rox（羧基x罗丹明）‑5’‑gatcattcgcccctcttttt‑3’lvm12r:5’‑atctacggttcgagagcaga‑3’lvm13f:Hex(六氯荧光素)‑5’‑ggactcacacttctggttc‑3’lvm13r:5’‑ggctgcaccttgtaagtc‑3’lvm14f:Tamra(羧基四甲基罗丹明)‑5’‑tatgctcgttccctttgctt‑3’lvm14r:5’‑ttgaaggaaaagtgttgggg‑3’lvm15f:6‑fam（羧基荧光素）‑5’‑actagtggatctgtctattcat‑3’lvm15r:5’‑atacccacccatgcatgtta‑3’。  
一种夏鲆精子便捷式超低温冷冻方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201310214338.2, 申请日期: 2013-09-25, 公开日期: 2013-09-25
发明人:  刘清华;  李军;  王文琪;  徐世宏;  韩龙江
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一种夏鲆精子便捷式超低温冷冻方法  其特征在于：1）冷冻保存：将活力高于85%的夏鲆精子与抗冻液以1:3‑1:2的体积比混合  2）解冻：将上述冻存冻精于亲鱼车间的循环水中即可解冻  混合后置于容器内再一并移入液氮罐内进行一步预冷  待冻精由固态融化为液态置于0‑4℃冰箱中保存备用。  两步冷冻  而后投入液氮中进行长期保存  
一种星斑川鲽精子超低温冷冻保存方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201310213169.0, 申请日期: 2013-09-25, 公开日期: 2013-09-25
发明人:  刘清华;  李军;  徐世宏;  韩龙江
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一种星斑川鲽精子超低温冷冻保存方法  所述抗冻液由稀释液、抗冻剂和添加剂组成  其特征在于：将星斑川鲽的精液与抗冻液按体积比1:3的比例混合  处理后投入到液氮（‑196℃）  在0℃孵育6‑8分钟  分装保存  抗冻剂为终浓度8%的（v/v）dmso（二甲基亚砜）和终浓度7%的（v/v）gly（甘油）  孵育后以分段方式降温处理  其中  稀释液为100mm蔗糖  100mm khco3  添加剂：5mm还原型谷胱甘肽  25mm nahco3  50mm牛磺酸  10%蛋黄（v/v）。  
太平洋鳕鱼精子高效超低温冷冻保存方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201310214264.2, 申请日期: 2013-09-25, 公开日期: 2013-09-25
发明人:  刘清华;  李军;  于道德;  官曙光
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孵育后以分段方式降温处理  一种太平洋鳕鱼精子高效超低温冷冻保存方法  其特征在于：将太平洋鳕鱼精液与抗冻液以1:4‑1:3的体积比例混合  混合后在0‑4℃孵育平衡8‑10分钟  处理后投入到液氮（‑196℃）  抗冻剂为终浓度10%（v/v）的丙二醇（pg）  分装保存  所述抗冻液由稀释液、抗冻剂、添加剂组成  添加剂为：终浓度5%（v/v）的蛋黄和终浓度5%bsa（v/v）。  其中稀释液为：nacl 8g/l  Na2hpo4·2h2o0.6g/l  Kh2po40.6g/l  海藻糖37.8g/l