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进行凡纳滨对虾家系鉴定的多重微卫星鉴定体系及应用 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201310340730.1, 申请日期: 2013-12-25, 公开日期: 2013-12-25
发明人:  于洋;  李富花;  张晓军;  相建海
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进行凡纳滨对虾家系鉴定的多重微卫星鉴定体系  包括多重微卫星引物体系  其特征在于：使用多态性高的lvm1‑lvm15共15对微卫星引物构成两个多重微卫星引物体系  所述的两个多重微卫星引物体系如下：1）多重微卫星引物体系1的引物序列和荧光标记组合为：lvm1f:6‑fam（羧基荧光素）‑5’‑gatgacctgcctttctctgc‑3’lvm1r:5’‑gggagagatgatgggaagaag‑3’lvm2f:Rox（羧基x罗丹明）‑5’‑atggcacaaataggatcttg‑3’lvm2r:5’‑gactggaagagcactgattc‑3’lvm3f:Hex(六氯荧光素)‑5’‑atacgaaacaccccatccc‑3’lvm3r:5’‑gtggtcttacctcgtggctc‑3’lvm4f:Tamra(羧基四甲基罗丹明)‑5’‑agcacctagcacttgctgaac‑3’lvm4r:5’‑agagactcacatcctcatcctc‑3’lvm5f:6‑fam（羧基荧光素）‑5’‑cattgaaaacggaatcctcg‑3’lvm5r:5’‑gatattcccatcaacacagcg‑3’lvm6f:Rox（羧基x罗丹明）‑5’‑caccaaaacgaacgaaacg‑3’lvm6r:5’‑ggataaaaacgaattgtataccg‑3’lvm7f:Hex(六氯荧光素)‑5’‑gagagcaaataagaaagggc‑3’lvm7r:5’‑aggatgcaaatgataacgag‑3’lvm8f:Tamra(羧基四甲基罗丹明)‑5’‑ggcacactgtttagtcctcg‑3’lvm8r:5’‑cgaacagaatggcagaggag‑3’lvm9f:6‑fam（羧基荧光素）‑5’‑cccgacttggcttttagttg‑3’lvm9r:5’‑gagattgctatcctcggctg‑3’lvm10f:Rox（羧基x罗丹明）‑5’‑gatcctgcgagtcactttatctc‑3’lvm10r:5’‑tttattgcgtatcccagaagc‑3’2）多重微卫星引物体系2的引物和荧光标记组合如下：lvm11f:6‑fam（羧基荧光素）‑5’‑ccgccatcatcatcaaca‑3’lvm11r:5’‑tcattcgggttcgagactc‑3’lvm12f:Rox（羧基x罗丹明）‑5’‑gatcattcgcccctcttttt‑3’lvm12r:5’‑atctacggttcgagagcaga‑3’lvm13f:Hex(六氯荧光素)‑5’‑ggactcacacttctggttc‑3’lvm13r:5’‑ggctgcaccttgtaagtc‑3’lvm14f:Tamra(羧基四甲基罗丹明)‑5’‑tatgctcgttccctttgctt‑3’lvm14r:5’‑ttgaaggaaaagtgttgggg‑3’lvm15f:6‑fam（羧基荧光素）‑5’‑actagtggatctgtctattcat‑3’lvm15r:5’‑atacccacccatgcatgtta‑3’。  
一种适用于文蛤家系鉴定的微卫星标记方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201210112325.X, 申请日期: 2012-10-10, 公开日期: 2012-10-10
发明人:  卢霞;  王鸿霞;  刘保忠
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一种适用于文蛤家系鉴定的微卫星标记方法  gc含量为40％?60％  包括微卫星位点来源、引物设计、引物优化和微卫星标记家系鉴定体系  2)引物设计：在微卫星重复的侧翼序列利用软件primer?premier?5.0设计引物  退火温度为45?65℃  其特征在于：1)微卫星位点的来源：提取文蛤的基因组dna利用提取的dna  引物设计条件为：引物长度为19?25mer  预期pcr产物长度为100?400bp  采用限制性内切酶法获得文蛤基因组dna片段  并构建微卫星磁珠富集文库  检测阳性克隆  3)引物优化：根据不同引物的tm值进行温度梯度优化  经测序得到含有微卫星重复的dna序列  在tm值上下各10℃  4)微卫星标记家系鉴定体系的确立：微卫星位点的多态性水平可用信息含量值(Pic)衡量  温度梯度优化扩增得到的pcr产物用8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳?eb染色系统进行检测  根据上述优化获得的ta值  选取杂带较少、特异性产物亮度较高的pcr反应对应的温度为该引物的最佳退火温度ta  选取多个体作为群体进行计算微卫星位点的多态性水平可用信息含量值(Pic)进而衡量多态性信息  根据pic值  Pic小于0.25的标记  筛选得到重复性好、稳定性好  Pic值大于0.25的位点  作为文蛤微卫星标记家系鉴定体系  用于文蛤的家系区分与个体识别。  
一种链酶亲和素结合功能荧光磁性纳米颗粒的制备方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201010261766.7, 申请日期: 2011-04-13, 公开日期: 2011-04-13
发明人:  陈英杰;  秦松;  刘少芳;  崔玉琳;  姜鹏;  陈华新;  李富超
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一种链酶亲和素结合功能荧光磁性纳米颗粒的制备方法  其特征在于：1)通过pcr反应将strep?ii标签基因分别连在别藻蓝蛋白apc的α和β亚基脱辅基蛋白基因的n末端  2)将strep?ii?apca基因片段插入到带有6×his基因的载体a中6×his基因的下游  分别得到strep?ii?apca和strep?ii?apcb基因片段  同时将藻胆素生物合成酶基因hol和pcya插入到载体上  将strep?ii?apcb基因片段插入到带有6×his基因的载体b中6×his基因的下游  待用  得到pcdf?strep?ii?apca?hol?pcya  同时将色基裂合酶基因cpcs和cpcu插入到载体上  3)将步骤2)所得两个表达载体同时转化大肠杆菌  待用  得到prsf?strep?ii?apcb?cpcs?cpcu  筛选获得同时表达上述基因的工程菌  4)将上述工程菌诱导培养后分离纯化  待用  得到双标签重组apc荧光蛋白质  5)将所得双标签重组apc荧光蛋白质与锌离子修饰的超顺磁性硅壳纳米颗粒振荡混合  即得到链酶亲和素结合功能荧光磁性纳米颗粒。