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| 一种在贝类幼虫中定量检测甲状腺激素的方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201210545897.7, 申请日期: 2014-01-22, 公开日期: 2014-01-22
发明人: 黄雯 ; 阙华勇; 许飞; 李莉; 张国范
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一种在贝类幼虫中定量检测甲状腺激素的方法 其特征在于:该方法包括如下步骤：1）将幼虫样品用液氮研磨法研磨成粉末状 2）研磨后进行低温干燥 分成ab两部分分别用于以下步骤 3）将a部分样品准确称量干重后 按固定比例加入0.01mol/l?naoh溶液 4）8000?12000rpm离心5?10min 2?8℃下充分浸润1h以上提取甲状腺激素 取上清 5）取步骤4）中的上清 用于定量检测甲状腺激素的含量 即总甲状腺素t4和总3 7）将步骤6）中裂解细胞释放蛋白用于检测样品中总蛋白含量 5 6）将b部分样品准确称量干重后加入细胞裂解液和pmsf室温放置1h以上 3′?三碘甲腺原氨酸t3 裂解细胞释放蛋白 8）将数据整合 计算出幼虫中每克蛋白含甲状腺激素x克 即xg/gprotein。 |
| 一种贝类snRNA U6基因及其引物和应用 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201210189971.6, 申请日期: 2014-01-01, 公开日期: 2014
发明人: 黄雯; 阙华勇; 许飞; 李莉; 张国范
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一种贝类small nuclear rna u6基因 其特征在于：具有序列表seqid no:1中碱基序列。 |
| 文昌鱼胚胎仔稚幼鱼循环水人工控制孵育系统 专利
专利类型: 实用新型, 专利号: CN201220662997.3, 申请日期: 2013-05-22, 公开日期: 2013-05-22
发明人: 谭训刚; 孙威; 徐永立; 张培军; 尤锋
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一种文昌鱼胚胎仔稚幼鱼循环水人工控制孵育系统 其特征在于：包括框架结构(4)、孵育容器(3)、恒温控制系统 其中框架结构(4)上设有多个孵育容器(3) 各孵育容器(3)均与恒温控制系统连接 通过恒温控制系统使孵育容器(3)内的胚胎仔或稚幼鱼生存在恒温环境中。 |
| 一种提取单个鱼卵仔鱼微量总DNA的简便快速方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201110027643.1, 申请日期: 2011-08-24, 公开日期: 2011-08-24
发明人: 尤锋; 吴志昊; 王伟; 徐冬冬; 张毅; 张培军; 徐永立
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1尾仔鱼/0.05?0.5ml无水乙醇 一种提取单个鱼卵仔鱼微量总dna的简便快速方法 其特征在于：1)样品固定：采集鱼卵或仔鱼 滤去水后立即加入无水乙醇 2)样品中固定液的去除：取步骤1)所得已固定的单个鱼卵或仔鱼样品 而后于?20℃或室温保存备用 加入生理盐水洗涤 3)样品消化：取上述洗涤过的单个鱼卵或仔鱼 鱼卵或仔鱼与无水乙醇比例为：1ml鱼卵/2?5ml无水乙醇 1000?2000g离心20?60秒去除多余生理盐水 加入100?300μl?dna提取缓冲液和10?30μl细胞裂解缓冲液 4)提取总dna：将步骤3)消化至澄清的溶液中加入100?300μl?5?6mol/l?nacl溶液 再用滤纸吸干样品 使细胞破壁 震荡20?30秒。15000g离心30分钟 重复2?3次 而后将细胞破壁的单个鱼卵或仔鱼加入10?100μg蛋白酶k和10?100μg?rna酶 吸取上清液使蛋白质去除 震荡混匀 然后在上清液中加入等体积异丙醇 于50?70℃温育 轻轻混匀 每10?20分钟颠倒混匀一次 ?20℃静置1?2小时 消化至溶液澄清 15000g离心15分钟 待用 沉淀即得到单个鱼卵仔鱼微量总dna。 |
| 一种海水鲆鲽鱼类受精卵的组织切片方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: ZL200410050434.9, 申请日期: 2007-12-05, 公开日期: 2011-07-15
发明人: 孙威; 尤锋; 张培军; 徐永立
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| 一种鲆鲽鱼类受精卵微管骨架免疫荧光染色观察方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN200510047579.8, 申请日期: 2007-05-02, 公开日期: 2007-05-02
发明人: 朱香萍; 尤锋; 张培军; 孙威; 徐永立
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权利要求书1、一种鲆鲽鱼类受精卵微管骨架免疫荧光染色和显微观察方法 其特征在于包括步骤如下：①采用改进的哌嗪-n ②在解剖镜下挑选出发育状态正常的受精卵 N’-双2-乙烷磺酸配制的甲醛-戊二醛固定液对样品进行固定 并用解剖针将胚盘从整个受精卵中剥离出来 ③在常温下用浓度百分比为1-2％的triton-100对样品进行打孔处理 受精卵在该固定液中室温下抚育3-6小时 再在含有80-200mm Nabh4的磷酸盐缓冲液中 其中：磷酸盐缓冲液成分为128mm Nacl 磷酸吐温缓冲溶液清洗 室温下抚育6-16小时 2mm Kcl ④采用改进的间接免疫荧光染色步骤对样品进行染色 然后在磷酸吐温缓冲溶液中于4℃下保存 8mm Nah2po4 其中：抚育抗体前非特异结合位点不封闭 抚育一抗过夜 抗体稀释液含有浓度百分比为10％的山羊血清和5％的二甲亚砜的tris盐酸缓冲液 待用 2mmkh2po4 抚育二抗为避光2-4小时 清洗液为含有155mm Nacl、10mm Tris-cl、ph为7.2-7.4的tris盐酸缓冲液 ⑤用荧光显微镜或激光扫描共聚焦显微镜进行观察。 Ph 7.2-7.4 及诺纳德p-40 其中诺纳德p-40占tris盐酸缓冲液浓度百分比的0.1-0.2％ |
