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中国科学院海洋研究所机构知识库
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一种对虾肠道微生物DNA的提取方法
专利
专利类型: 发明, 专利号: CN200910263665.0, 申请日期: 2010-06-23, 公开日期: 2010-06-23
发明人:
刘淮德
;
王雷
;
刘梅
;
王宝杰
;
蒋克勇
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浏览/下载:316/1
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提交时间:2014/08/04
一种对虾肠道微生物dna的提取方法
其特征在于:1)将0.01-0.05g对虾肠道在液氮下研磨
2)将洗脱液在200g离心5-10min
并加入0.8-1.2ml?pbs、15-25μl?pvpp匀浆和200-300μl?0.5%tween-80
取上清菌液待用
沉淀中加0.8-1.2ml?pbs以200g离心取上清菌液
3)将步骤2)所得上清菌液以1200g离心5-10min
均匀后吹打洗脱3-5min
将两次离心所得上清菌液合并
收集上清菌液
合并上清液以300g离心5-10min
4)将步骤3)所得上清菌液中加100-150μlctab提取液和10-15μl溶菌酶
取上清菌液待用
放入37℃摇床
而后加15-20μl?20%(W/c)Sds和10-15μl蛋白酶k
振荡30-40min
60-70℃水浴1-2h
5)将水浴后菌液在4℃?3200g离心8-15min
取上清菌液
6)将水浴后菌液以3200g离心8-15min
而后加100-150μl?ctab液和20-25μl?20%sds混匀后
取上清菌液
7)将步骤6)所得上清菌液中加上清菌液体积0.6-0.8倍的异丙醇
涡旋
而后加入与上述上清菌液等体积的酚/氯仿混合液
而后于-20℃静置1-2h
8)将步骤7)所得沉淀中加入600-800μl?70%预冷乙醇
60-70℃水浴10-15min
14000g离心10-15min
再以4℃?14000g离心10-15min
14000g离心10-15min
取上清菌液待用
所得沉淀待用
所得沉淀即为对虾肠道微生物dna。