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一种大菱鲆精子高效超低温冷冻保存的方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201310213012.8, 申请日期: 2013-10-16, 公开日期: 2013-10-16
发明人:  刘清华;  李军;  肖志忠;  韩龙江
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一种大菱鲆精子高效超低温冷冻保存的方法  其特征在于：将大菱鲆的精液与抗冻液按体积比3:1‑4:1的比例混合  抗冻液由稀释液、抗冻剂、添加剂三部分组成其中  添加剂：蔗糖34.2g/l和终浓度10%的蛋黄（v/v）。  混合后经过两步降温处理  稀释液为nacl8g/l  抗冻剂为终浓度60%（v/v）的dmso（二甲基亚砜）或终浓度60%（v/v）  一步平衡后投入到液氮（‑196℃）  Kcl0.4g/l  的丙二醇（pg）  分装保存  Mgso4·7h2o0.1g/l  Mgcl2·6h2o0.1g/l  Na2hpo4·2h2o0.06g/l  Kh2po40.06g/l  Nahco30.35g/l  
一种星斑川鲽精子超低温冷冻保存方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201310213169.0, 申请日期: 2013-09-25, 公开日期: 2013-09-25
发明人:  刘清华;  李军;  徐世宏;  韩龙江
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一种星斑川鲽精子超低温冷冻保存方法  所述抗冻液由稀释液、抗冻剂和添加剂组成  其特征在于：将星斑川鲽的精液与抗冻液按体积比1:3的比例混合  处理后投入到液氮（‑196℃）  在0℃孵育6‑8分钟  分装保存  抗冻剂为终浓度8%的（v/v）dmso（二甲基亚砜）和终浓度7%的（v/v）gly（甘油）  孵育后以分段方式降温处理  其中  稀释液为100mm蔗糖  100mm khco3  添加剂：5mm还原型谷胱甘肽  25mm nahco3  50mm牛磺酸  10%蛋黄（v/v）。  
一种海洋微藻及其培养方法和应用 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201010515598.X, 申请日期: 2012-05-16, 公开日期: 2012-05-16
发明人:  韩笑天;  郑立;  俞志明;  邹景忠
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一种海洋微藻  其特征在于：海洋微藻为球等鞭金藻(isochrysis?sp.ccmm5001)  于2010年6月7日保藏于中国典型培养物保藏中心(Cctcc)  保藏号为cctcc?no：m2010138。  
一种提取单个鱼卵仔鱼微量总DNA的简便快速方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201110027643.1, 申请日期: 2011-08-24, 公开日期: 2011-08-24
发明人:  尤锋;  吴志昊;  王伟;  徐冬冬;  张毅;  张培军;  徐永立
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1尾仔鱼/0.05?0.5ml无水乙醇  一种提取单个鱼卵仔鱼微量总dna的简便快速方法  其特征在于：1)样品固定：采集鱼卵或仔鱼  滤去水后立即加入无水乙醇  2)样品中固定液的去除：取步骤1)所得已固定的单个鱼卵或仔鱼样品  而后于?20℃或室温保存备用  加入生理盐水洗涤  3)样品消化：取上述洗涤过的单个鱼卵或仔鱼  鱼卵或仔鱼与无水乙醇比例为：1ml鱼卵/2?5ml无水乙醇  1000?2000g离心20?60秒去除多余生理盐水  加入100?300μl?dna提取缓冲液和10?30μl细胞裂解缓冲液  4)提取总dna：将步骤3)消化至澄清的溶液中加入100?300μl?5?6mol/l?nacl溶液  再用滤纸吸干样品  使细胞破壁  震荡20?30秒。15000g离心30分钟  重复2?3次  而后将细胞破壁的单个鱼卵或仔鱼加入10?100μg蛋白酶k和10?100μg?rna酶  吸取上清液使蛋白质去除  震荡混匀  然后在上清液中加入等体积异丙醇  于50?70℃温育  轻轻混匀  每10?20分钟颠倒混匀一次  ?20℃静置1?2小时  消化至溶液澄清  15000g离心15分钟  待用  沉淀即得到单个鱼卵仔鱼微量总dna。