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一种大菱鲆精子高效超低温冷冻保存的方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201310213012.8, 申请日期: 2013-10-16, 公开日期: 2013-10-16
发明人:  刘清华;  李军;  肖志忠;  韩龙江
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一种大菱鲆精子高效超低温冷冻保存的方法  其特征在于：将大菱鲆的精液与抗冻液按体积比3:1‑4:1的比例混合  抗冻液由稀释液、抗冻剂、添加剂三部分组成其中  添加剂：蔗糖34.2g/l和终浓度10%的蛋黄（v/v）。  混合后经过两步降温处理  稀释液为nacl8g/l  抗冻剂为终浓度60%（v/v）的dmso（二甲基亚砜）或终浓度60%（v/v）  一步平衡后投入到液氮（‑196℃）  Kcl0.4g/l  的丙二醇（pg）  分装保存  Mgso4·7h2o0.1g/l  Mgcl2·6h2o0.1g/l  Na2hpo4·2h2o0.06g/l  Kh2po40.06g/l  Nahco30.35g/l  
一种夏鲆冻精与牙鲆种间杂交人工授精的方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201310212970.3, 申请日期: 2013-10-16, 公开日期: 2013-10-16
发明人:  刘清华;  李军;  徐世宏;  马道远
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一种夏鲆冻精与牙鲆种间杂交人工授精的方法  其特征在于：将长期超低温冷冻保存的夏鲆精子经二步水浴解冻  其中  溶解后夏鲆冻精中加入其3倍体积的稀释液  稀释液为nacl  离心收集沉淀  Kh2po4和水组成。  而后与牙鲆卵子进行人工授精  
太平洋鳕鱼精子高效超低温冷冻保存方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201310214264.2, 申请日期: 2013-09-25, 公开日期: 2013-09-25
发明人:  刘清华;  李军;  于道德;  官曙光
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孵育后以分段方式降温处理  一种太平洋鳕鱼精子高效超低温冷冻保存方法  其特征在于：将太平洋鳕鱼精液与抗冻液以1:4‑1:3的体积比例混合  混合后在0‑4℃孵育平衡8‑10分钟  处理后投入到液氮（‑196℃）  抗冻剂为终浓度10%（v/v）的丙二醇（pg）  分装保存  所述抗冻液由稀释液、抗冻剂、添加剂组成  添加剂为：终浓度5%（v/v）的蛋黄和终浓度5%bsa（v/v）。  其中稀释液为：nacl 8g/l  Na2hpo4·2h2o0.6g/l  Kh2po40.6g/l  海藻糖37.8g/l