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一种适用于文蛤家系鉴定的微卫星标记方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201210112325.X, 申请日期: 2012-10-10, 公开日期: 2012-10-10
发明人:  卢霞;  王鸿霞;  刘保忠
Adobe PDF(798Kb)  |  收藏  |  浏览/下载：225/0  |  提交时间：2014/08/04
一种适用于文蛤家系鉴定的微卫星标记方法  gc含量为40％?60％  包括微卫星位点来源、引物设计、引物优化和微卫星标记家系鉴定体系  2)引物设计：在微卫星重复的侧翼序列利用软件primer?premier?5.0设计引物  退火温度为45?65℃  其特征在于：1)微卫星位点的来源：提取文蛤的基因组dna利用提取的dna  引物设计条件为：引物长度为19?25mer  预期pcr产物长度为100?400bp  采用限制性内切酶法获得文蛤基因组dna片段  并构建微卫星磁珠富集文库  检测阳性克隆  3)引物优化：根据不同引物的tm值进行温度梯度优化  经测序得到含有微卫星重复的dna序列  在tm值上下各10℃  4)微卫星标记家系鉴定体系的确立：微卫星位点的多态性水平可用信息含量值(Pic)衡量  温度梯度优化扩增得到的pcr产物用8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳?eb染色系统进行检测  根据上述优化获得的ta值  选取杂带较少、特异性产物亮度较高的pcr反应对应的温度为该引物的最佳退火温度ta  选取多个体作为群体进行计算微卫星位点的多态性水平可用信息含量值(Pic)进而衡量多态性信息  根据pic值  Pic小于0.25的标记  筛选得到重复性好、稳定性好  Pic值大于0.25的位点  作为文蛤微卫星标记家系鉴定体系  用于文蛤的家系区分与个体识别。