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一种提取单个鱼卵仔鱼微量总DNA的简便快速方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201110027643.1, 申请日期: 2011-08-24, 公开日期: 2011-08-24
发明人:  尤锋;  吴志昊;  王伟;  徐冬冬;  张毅;  张培军;  徐永立
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1尾仔鱼/0.05?0.5ml无水乙醇  一种提取单个鱼卵仔鱼微量总dna的简便快速方法  其特征在于：1)样品固定：采集鱼卵或仔鱼  滤去水后立即加入无水乙醇  2)样品中固定液的去除：取步骤1)所得已固定的单个鱼卵或仔鱼样品  而后于?20℃或室温保存备用  加入生理盐水洗涤  3)样品消化：取上述洗涤过的单个鱼卵或仔鱼  鱼卵或仔鱼与无水乙醇比例为：1ml鱼卵/2?5ml无水乙醇  1000?2000g离心20?60秒去除多余生理盐水  加入100?300μl?dna提取缓冲液和10?30μl细胞裂解缓冲液  4)提取总dna：将步骤3)消化至澄清的溶液中加入100?300μl?5?6mol/l?nacl溶液  再用滤纸吸干样品  使细胞破壁  震荡20?30秒。15000g离心30分钟  重复2?3次  而后将细胞破壁的单个鱼卵或仔鱼加入10?100μg蛋白酶k和10?100μg?rna酶  吸取上清液使蛋白质去除  震荡混匀  然后在上清液中加入等体积异丙醇  于50?70℃温育  轻轻混匀  每10?20分钟颠倒混匀一次  ?20℃静置1?2小时  消化至溶液澄清  15000g离心15分钟  待用  沉淀即得到单个鱼卵仔鱼微量总dna。  
一种海水中亚铁、三价铁及总铁含量的测定方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201010110284.1, 申请日期: 2010-07-21, 公开日期: 2010-07-21
发明人:  吴志昊;  尤锋;  马得友;  徐冬冬;  张培军;  徐永立
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fe ( ii ) l&Alpha  一种海水中亚铁、三价铁及总铁含量的测定方法  ③向1-5ml空白对照溶液、已知浓度的标准溶液及待测水样中分别加入100-500μl用0.05-0.2mol/l乙酸铵水溶液配制的0.01-0.05mol/l菲咯嗪一钠盐溶液显色   - a 2 &Epsiv  其特征在于  ②向步骤①所得经酸化的水样中加入1-2mol/l氢氧化钠溶液   fe ( iii ) l &Epsiv  具体步骤如下：①采集10-100ml水样  氢氧化钠溶液与水样的体积比为1∶(20-100)   fe ( ii ) l&Alpha  立即加入1-2mol/l盐酸  使水样ph在4-6之间  其中   ( &Epsiv  盐酸与水样的体积比为1∶(20-100)  作为待测水样  空白对照溶液配制方法为  已知浓度的标准溶液配制方法为   fe ( ii ) l - &Epsiv  使水样ph至1-2  先配制与待测水样初始盐度一致的氯化钠水溶液  取ph已经调至4-6的空白对照溶液  ④在562nm波长下   fe ( iii ) l ) c fe ( iii ) = a 2 - a 1 &Alpha  作为酸化水样  再加入1-2mol/l盐酸使其ph在4-6之间  加入fecl3使其总铁浓度为0.1-1mg/l  先将空白对照溶液的吸光度设置为零后  ⑤取0.8-4ml测定吸光度后的空白对照溶液、标准溶液及待测水样   &Alpha  密封  测定标准溶液及待测水样的吸光度a1样  加入150-750μl用1-3mol/l盐酸配制的1-2mol/l的盐酸羟胺溶液混匀  室温静置5-10min后  ⑦重复步骤⑤   ( &Epsiv  室温下备用  A1标  再加入50-250μl用氨水配制的ph为9-10的10mol/l乙酸铵水溶液混匀  ⑥在562nm波长下   fe ( ii ) l - &Epsiv  先将空白对照溶液的吸光度设置为零后  测定标准溶液及待测水样的吸光度a2样  在562nm波长下   c fe ( ii ) = a 1 &Epsiv   fe ( Iii ) l ) cfe(t)＝cfe(Ii)+cfe(Iii)其中  A2标  先将空白对照溶液的吸光度设置为零后  ⑧亚铁、三价铁和总铁浓度计算  L为比色皿的光径。  测定标准溶液的吸光度a3标  通过标准溶液的总铁浓度及其测定的3次吸光度先根据下述公式计算出亚铁和三价铁的吸光系数εfe(Ii)、εfe(Iii)以及α  Α＝a3/a2  以此再结合水样测定的2次吸光度利用下述公式计算出海水水样中亚铁cfe(Ii)、三价铁cfe(Iii)及总铁cfe(t)浓度