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一种提取单个鱼卵仔鱼微量总DNA的简便快速方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201110027643.1, 申请日期: 2011-08-24, 公开日期: 2011-08-24
发明人:  尤锋;  吴志昊;  王伟;  徐冬冬;  张毅;  张培军;  徐永立
Adobe PDF(757Kb)  |  收藏  |  浏览/下载：565/2  |  提交时间：2014/08/04
1尾仔鱼/0.05?0.5ml无水乙醇  一种提取单个鱼卵仔鱼微量总dna的简便快速方法  其特征在于：1)样品固定：采集鱼卵或仔鱼  滤去水后立即加入无水乙醇  2)样品中固定液的去除：取步骤1)所得已固定的单个鱼卵或仔鱼样品  而后于?20℃或室温保存备用  加入生理盐水洗涤  3)样品消化：取上述洗涤过的单个鱼卵或仔鱼  鱼卵或仔鱼与无水乙醇比例为：1ml鱼卵/2?5ml无水乙醇  1000?2000g离心20?60秒去除多余生理盐水  加入100?300μl?dna提取缓冲液和10?30μl细胞裂解缓冲液  4)提取总dna：将步骤3)消化至澄清的溶液中加入100?300μl?5?6mol/l?nacl溶液  再用滤纸吸干样品  使细胞破壁  震荡20?30秒。15000g离心30分钟  重复2?3次  而后将细胞破壁的单个鱼卵或仔鱼加入10?100μg蛋白酶k和10?100μg?rna酶  吸取上清液使蛋白质去除  震荡混匀  然后在上清液中加入等体积异丙醇  于50?70℃温育  轻轻混匀  每10?20分钟颠倒混匀一次  ?20℃静置1?2小时  消化至溶液澄清  15000g离心15分钟  待用  沉淀即得到单个鱼卵仔鱼微量总dna。  
黑鲷精子诱导漠斑牙鲆雌核发育研究 期刊论文
水产科学, 2011, 期号: 12, 页码: 744-748
作者:  徐加涛;  尤锋;  许建和;  阎斌伦;  毕祥静;  王怀忠
Adobe PDF(641Kb)  |  收藏  |  浏览/下载：206/0  |  提交时间：2013/09/27
漠斑牙鲆  黑鲷  雌核发育  冷休克  
牙鲆同质雌核发育人工诱导研究 期刊论文
高技术通讯, 2008, 卷号: 18, 期号: 8, 页码: 874-880
作者:  尤锋;  许建和;  倪静;  孙威;  朱香萍;  徐冬冬;  徐永立;  张培军
Adobe PDF(393Kb)  |  收藏  |  浏览/下载：256/0  |  提交时间：2011/07/25
牙鲆(Paralichthys olivaceus)与大菱鲆(Scophthalmus maximus)受精前期微管骨架的免疫荧光观察 期刊论文
海洋与湖沼, 2008, 卷号: 39, 期号: 2, 页码: 190-196
作者:  朱香萍;  尤锋;  张培军;  徐永立
Adobe PDF(732Kb)  |  收藏  |  浏览/下载：174/0  |  提交时间：2011/07/25
一种鲆鲽鱼类受精卵微管骨架免疫荧光染色观察方法 专利
专利类型: 发明, 专利号: CN200510047579.8, 申请日期: 2007-05-02, 公开日期: 2007-05-02
发明人:  朱香萍;  尤锋;  张培军;  孙威;  徐永立
Adobe PDF(674Kb)  |  收藏  |  浏览/下载：308/1  |  提交时间：2014/08/04
权利要求书1、一种鲆鲽鱼类受精卵微管骨架免疫荧光染色和显微观察方法  其特征在于包括步骤如下：①采用改进的哌嗪-n  ②在解剖镜下挑选出发育状态正常的受精卵  N’-双2-乙烷磺酸配制的甲醛-戊二醛固定液对样品进行固定  并用解剖针将胚盘从整个受精卵中剥离出来  ③在常温下用浓度百分比为1-2％的triton-100对样品进行打孔处理  受精卵在该固定液中室温下抚育3-6小时  再在含有80-200mm Nabh4的磷酸盐缓冲液中  其中：磷酸盐缓冲液成分为128mm Nacl  磷酸吐温缓冲溶液清洗  室温下抚育6-16小时  2mm Kcl  ④采用改进的间接免疫荧光染色步骤对样品进行染色  然后在磷酸吐温缓冲溶液中于4℃下保存  8mm Nah2po4  其中：抚育抗体前非特异结合位点不封闭  抚育一抗过夜  抗体稀释液含有浓度百分比为10％的山羊血清和5％的二甲亚砜的tris盐酸缓冲液  待用  2mmkh2po4  抚育二抗为避光2-4小时  清洗液为含有155mm Nacl、10mm Tris-cl、ph为7.2-7.4的tris盐酸缓冲液  ⑤用荧光显微镜或激光扫描共聚焦显微镜进行观察。  Ph 7.2-7.4  及诺纳德p-40  其中诺纳德p-40占tris盐酸缓冲液浓度百分比的0.1-0.2％