两种真核微藻类胡萝卜素代谢工程的初步研究

IOCAS-IR > 海洋环流与波动重点实验室

	两种真核微藻类胡萝卜素代谢工程的初步研究
	檀琮萍
学位类型	博士
	2006-05-18
学位授予单位	中国科学院海洋研究所
学位授予地点	海洋研究所
关键词	莱茵衣藻盐生杜氏藻 Β-胡萝卜素羟化酶基因（crtr-b） Β-胡萝卜素酮化酶基因（bkt）基因枪法草丁膦 Bar基因 Gus 八氢番茄红素合成酶基因（psy）
摘要	类胡萝卜素在生物体内具有重要的生理功能，其中虾青素的抗氧化活性、提高动物的免疫能力，预防癌症等生理功能更为显著。类胡萝卜素的代谢工程在大肠杆菌、酵母和高等植物中已取得了较大的进展。本文对真核微藻类胡萝卜素代谢工程进行了初步的探索。 1．克隆雨生红球藻β-胡萝卜素羟化酶基因crtR-B，基因枪法转入衣藻叶绿体，经强光处理转化子，HPLC分析表明细胞的叶黄素库（V＋A＋Z）量较野生型增加，表明是外源的β-胡萝卜素羟化酶将β-胡萝卜素生成玉米黄素。 2．克隆雨生红球藻β-胡萝卜素酮化酶基因bkt，基因枪法转入衣藻叶绿体，RT-PCR及RT-PCR Southern blot分析表明外源基因具有转录活性，但未检测到转化子中积累虾青素。 3．根据盐生杜氏藻大量积累β-胡萝卜素的特点，对其遗传转化体系进行了研究。发现20 µg/ml草丁膦Basta，能够完全抑制1.0×106个/ml细胞生长；通过GUS报告基因在细胞内的瞬时表达，确立了轰击压力450 psi、距离6 cm为基因枪法转化盐生杜氏藻的最佳条件；将bar基因转入细胞，得到稳定的转化子，初步建立了盐生杜氏藻稳定遗传转化体系。克隆了盐生杜氏藻八氢番茄红素合成酶基因psy的cDNA序列、基因组序列及psy基因上游459 bp片段。本文首次开展了衣藻类胡萝卜素代谢工程研究，发现在强光处理下，衣藻crtR-B转化子外源的羟化酶作用使叶黄素库量增加，实现了对衣藻类胡萝卜素代谢途径的修饰。确立了bar基因为选择标记、Basta为筛选试剂的基因枪转化盐生杜氏藻的遗传转化体系，并克隆了其内源的psy基因5’上游序列，为通过基因工程手段在盐生杜氏藻细胞内积累虾青素奠定了基础。
页数	145
语种	中文
文献类型	学位论文
条目标识符	http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/521
专题	海洋环流与波动重点实验室
推荐引用方式 GB/T 7714	檀琮萍. 两种真核微藻类胡萝卜素代谢工程的初步研究[D]. 海洋研究所. 中国科学院海洋研究所,2006.

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