IOCAS-IR  > 实验海洋生物学重点实验室
海藻内生真菌杂色曲霉EN-298和皮落青霉EN-311化学成分研究
王佳宁
学位类型硕士
导师王斌贵
2015-05-22
学位授予单位中国科学院大学
学位授予地点北京
学位专业海洋药物学
关键词海藻内生真菌 杂色曲霉 皮落青霉 次级代谢产物 卤虫致死活性
摘要本文对采集自山东烟台海域的海藻进行了内生真菌分离、菌株筛选、成分分离与鉴定及单体化合物的生物活性研究。从30余种海藻(包括叉开网翼藻、鸭毛藻、凹顶藻、日本仙菜、角叉菜、松节藻等)中分离得到了30余株内生真菌,采用生物活性筛选(包括抗真菌、抗细菌、卤虫致死等活性)和化学筛选(薄层层析、高效液相色谱等方法)等方法从中优选得到两株内生真菌,即日本仙菜内生真菌杂色曲霉(Aspergillus versicolor EN-298)和松节藻内生真菌皮落青霉(Penicillium crustosum EN-311)进行了化学成分与生物活性研究。 采用PDB培养基对这两株海藻内生真菌EN-298和EN-311进行规模发酵,培养时间为30天,用乙酸乙酯和80%丙酮水分别对发酵液和菌丝体进行萃取。经过HPLC和TLC分析,发现乙酸乙酯提取物和菌丝体提取物成分基本相同,于是将两部分合并。之后采用反相硅胶柱层析、正相硅胶柱层析、凝胶柱层析、制备薄层层析、制备液相等分离方法对得到的粗提物进行分离纯化。 从日本仙菜内生真菌EN-298中分离得到15个单体化合物并采用MS、UV、IR、1H-NMR、13C-NMR、HSQC、HMBC、1H-1H COSY等波谱学方法鉴定了所有单体化合物的结构(AV1-AV15),其中包括3个四降二萜类化合物(AV7-AV9),6个聚酮类化合物(AV1-AV6)。从松节藻内生真菌EN-311中分离得到15个单体化合物并采用MS、UV、IR、1H-NMR、13C-NMR、HSQC、HMBC、1H-1H COSY等波谱学方法鉴定了所有单体化合物的结构(PC1-PC15),其中包括8个混源萜类化合物(PC1-PC8),有3个混源萜类化合物为新化合物(PC1-PC3)。对分离得到的部分单体化合物进行了生物活性测试,包括抗菌MIC测试、卤虫致死活性测试。其中从松节藻来源内生真菌EN-311分离得到的混源萜类化合物具有较好的卤虫致死活性。PC1、PC2具有非常显著的卤虫致死活性,LD50值分别是1.98和1.56 μg/ml。本论文从两株海藻内生真菌中分离得到了30个化合物,其中包括3个混源萜类新化合物,丰富了天然产物的研究内容。
其他摘要More than thirty different kinds of algae were collected from Yantai coastline of Shandong Province and then almost thirty diverse fungal strains were isolated from these algae. Sebsequently we screened the alternative strains by TLC and HPLC. As might be expected, two strains were found which had rich metabolites as well as perfect resolution, namely EN-311 and EN-298. The two fungi were cultivated in the 18×1L Erlenmeyer flasks each containing 300 ml PDB medium for 30 days, respectively. After that the culture broth was separated from the mycelia by filtration and extracted with EtOAc, while the mycelia were extracted with a mixture of 80% acetone and 20% water. The combined extracts were subjected to a variety of methods to obtain compounds, including column chromatography, preparative thin layer chromatography and so on. Finally, 30 compounds were yielded with persistent effort. Adopting such spectral analysis as 1H-NMR, 13C-NMR, MS, UV, IR, we determined all structures of purified compounds including many different types of compounds like six polyketids (AV1-AV6), three norditerpenes (AV7-AV9), eight meroterpenes (PC1-PC8). Among these compounds, there were three new meroterpenes (PC1、PC2、PC3). Last but not least, several biological activity assays were conducted in order to evaluate activites of a part of isolated compounds including brine shrimp lethality and antibacterial activity. Among all the isolated compounds, some meroterpenes produced by EN-311 exhibited significant brine shrimp lethality. In particular, compound PC1 and PC2 showed significant activity with the value of LD50 1.98 and 1.56 μg/ml, respectively.
语种中文
文献类型学位论文
条目标识符http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/22767
专题实验海洋生物学重点实验室
作者单位中国科学院海洋研究所
第一作者单位中国科学院海洋研究所
推荐引用方式
GB/T 7714
王佳宁. 海藻内生真菌杂色曲霉EN-298和皮落青霉EN-311化学成分研究[D]. 北京. 中国科学院大学,2015.
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