对虾MyD88 和STAT 在WSSV 感染过程中的功能研究

IOCAS-IR > 实验海洋生物学重点实验室

	对虾MyD88 和STAT 在WSSV 感染过程中的功能研究
	温荣
学位类型	博士
导师	李富花
	2014-05
学位授予单位	中国科学院研究生院
学位授予地点	北京
学位专业	海洋生物学
关键词	对虾 Myd88 Stat Wssv Rnai
其他摘要	对虾是重要的水产养殖种类之一，由于各类病害的爆发，特别是白斑综合症的威胁，对虾养殖产业经受了巨大的损失。对虾抵御病原侵袭的方式是启动先天免疫应答系统，特别是通过信号通路的启动完成对病原的识别和清除。已有研究表明，对虾先天免疫系统中两条重要的信号通路：Toll 通路和JAK/STAT 通路可能参与了对虾应答白斑综合症病毒的过程。然而，有关对虾Toll 通路的关键接头分子MyD88 的功能尚未报道，JAK/STAT 通路的转录因子STAT 在对虾感染WSSV 过程中的功能尚不清楚。基于上述问题，本文对对虾的MyD88 和STAT 在WSSV 侵染过程中的作用进行了研究，研究进展如下： 1. 从中国明对虾中克隆获得了MyD88 的同源基因---FcMyD88，其cDNA 全长1434bp，编码477 个氨基酸。推导的氨基酸序列中包含死亡结构域（death domain，DD）和TIR 结构域（typical TLR and IL-1R-related，TIR），在其C 端有一段约100 个氨基酸组成的C 端延伸区域（C-terminal extension，CTE）。定量PCR 和免疫印迹分析发现，FcMyD88 mRNA 在藤黄微球菌（Micrococcus luteus）和鳗弧菌（Vibrio anguillarum）刺激后的24 小时内均上调表达；FcMyD88 蛋白在V. anguillarum 刺激的12 小时上调表达，而在M. luteus 刺激后无明显变化；FcMyD88 mRNA 虽然在WSSV 刺激后表达量相对稳定，但是FcMyD88 蛋白在WSSV 刺激后明显上调表达；用WSSV 感染MyD88 沉默后的对虾，由WSSV 感染引起的对虾死亡率显著降低。以上结果表明MyD88 依赖的信号通路参与了对虾抵御细菌和WSSV 感染过程，MyD88 可能有利于WSSV 的感染。 2. 利用dsRNA 干扰技术沉默对虾STAT 基因后再感染WSSV，观察WSSV在对虾中的拷贝数和由WSSV 感染引起的对虾死亡率，结果表明，在STAT 基因沉默后的对虾中，WSSV 拷贝数维持在102-103 copies/ng DNA，显著少于对照组，并且其死亡率也显著低于对照组。为进一步了解STAT 基因的功能，又利用培养的螯虾造血细胞进行了研究，利用STAT3 特异抑制剂（S3I-201）抑制鳌虾造血细胞的STAT 活性后再用WSSV 感染细胞，其细胞存活率显著高于未经抑制剂处理的对照组，说明STAT 在WSSV 感染对虾的过程中起着重要作用。为了解对虾MyD88 和STAT 在WSSV 感染过程中的功能研究在STAT 干扰后的对虾中STAT 通路可能调控的目的基因以及RNAi 调控通路的相关基因的表达，利用实时定量PCR 技术对STAT 干扰后的对虾中相关基因的表达进行了分析，结果表明，与注射EGFP 双链RNA 的对照组相比，在STAT被干扰的对虾中再感染WSSV 后，GILT, Dicer2 和AGO2 基因的表达明显上调，而AGO1 和Dicer1 基因的表达没有发生明显变化，说明STAT 被干扰后的对虾可能通过增强siRNA 通路达到抗WSSV 感染的目的。 3. 利用高通量的RNA-seq 技术筛选STAT 被干扰的对虾中差异表达的基因，结果表明，STAT 干扰引起了参与能量代谢、糖代谢、外骨骼组成、转录及免疫等生命过程的基因表达的变化。其中，与能量代谢相关酶类，如腺苷酸环化酶、细胞色素c 氧化酶I 亚基；外骨骼组成相关蛋白，如Culticle、DD5、DD9A；转录相关分子，如转录起始因子TFIID 和RNA 解旋酶等基因的表达均下调。而与糖代谢相关分子、免疫相关分子等的表达既有上调也有下调，说明STAT 干扰改变了对虾体内许多基因的转录表达，这些基因的表达变化可能不利于WSSV 在对虾体内的复制。本研究筛选的对虾STAT 潜在调控的基因信息，为进一步分析JAK/STAT 对虾免疫中的功能奠定了重要基础。
语种	中文
文献类型	学位论文
条目标识符	http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/18096
专题	实验海洋生物学重点实验室
推荐引用方式 GB/T 7714	温荣. 对虾MyD88 和STAT 在WSSV 感染过程中的功能研究[D]. 北京. 中国科学院研究生院,2014.

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对虾MyD88 和STAT 在WSSV （3046KB）			限制开放	CC BY-NC-SA	浏览