条石鲷 (Oplegnathus fasciatus)OfIL-12p40的克隆、表达及相关功能的研究

IOCAS-IR > 实验海洋生物学重点实验室

	条石鲷 (Oplegnathus fasciatus)OfIL-12p40的克隆、表达及相关功能的研究
	张璐
学位类型	硕士
导师	孙黎 ; 胡永华
	2014-05
学位授予单位	中国科学院研究生院
学位授予地点	北京
学位专业	生物工程
关键词	Il-12p40 条石鲷细胞因子免疫防御细菌感染
其他摘要	IL-12p40，也被称为IL-12β，是促炎性细胞因子白细胞介素（interlelukin, IL）-12和IL-23的亚基, 主要由激活的单核细胞，巨噬细胞和树突状细胞产生。哺乳动物中，IL12p40由位于染色体5q31-33的IL-12p40编码，具有促炎和免疫调节活性。三种同源异构体p40a、p40b、p40c已在多种鱼中被鉴定，包括草鱼、大西洋比目鱼、鲤鱼、河豚和斑马鱼，但鱼类IL-12p40的生物学功能还未知。本研究中，我们克隆鉴定了条石鲷(Oplegnathus fasciatus)的IL-12p40基因，OfIL-12p40，并对其基因结构和生物学功能进行了相关分析。 OfIL-12p40 cDNA全长1809个碱基，其中，5’ UTR长为81 bp，ORF长1086 bp，3’ UTR长642 bp， 3’ UTR有2个细胞因子典型的结构ATTTA；OfIL-12p40由361个氨基酸残基构成，具有一个保守的IL-12p40结构域和一个IL-12p40特征性结构—— WSxWS模体, OfIL-12p40氨基酸序列中有五个半胱氨酸残基 C44，C92，C120，C131和C156，在鱼类、人类和小鼠的IL-12p40中是完全保守的；有三个半胱氨酸残基，C127，C149和C223，只在鱼类的IL-12p40中存在；序列分析发现，OfIL-12p40与多种硬骨鱼的同系物具有46-57%的序列一致性；系统发育分析显示，OfIL-12p40属于p40c。实时定量PCR结果显示，OfIL-12p40在条石鲷的脑、腮、心、肝、脾、肌、肠、肾中组成型表达，其中，在脑中的表达量最低，在肾中的表达量最高。当条石鲷受到细菌感染后， OfIL-12p40在肾和脾中的表达显著上调，其中，肾中OfIL-12p40的表达上调倍数最大值出现在刺激后48 h，脾中OfIL-12p40的表达上调倍数最大值则出现在感染后24 h，分别为16.3和6.9。为研究OfIL-12p40的功能，体外重组表达并纯化了的重组蛋白OfIL-12p40（rOfIL-12p40）。生物学功能分析表明，rOfIL-12p40能增强条石鲷外周血白细胞的呼吸爆发强度，并存在一定的剂量效应。rOfIL-12p40还能增强条石鲷抵抗细菌侵染的能力，上调肾中多个免疫相关基因，如IL-1β，IFN1，CCK1，IRF-4，ISG15和C7的表达量，分别为对照组的18.6、7.5、14.9、8.0、6.8和24.6倍。这些实验结果表明，OfIL-12p40具有细胞因子的特性，在抵御细菌侵染的免疫防御中起到一定的作用。
语种	中文
文献类型	学位论文
条目标识符	http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/18047
专题	实验海洋生物学重点实验室
推荐引用方式 GB/T 7714	张璐. 条石鲷 (Oplegnathus fasciatus)OfIL-12p40的克隆、表达及相关功能的研究[D]. 北京. 中国科学院研究生院,2014.

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