IOCAS-IR  > 实验海洋生物学重点实验室
牙鲆性别相关基因克隆与RT-PCR差异表达谱分析
翁申达
学位类型硕士
导师尤锋
2013-05
学位授予单位中国科学院研究生院
学位专业海洋生物学
关键词牙鲆 性别相关 基因克隆 表达
摘要牙鲆(Paralichthys olivaceus)是我国重要的海洋经济鱼类,其雌性个体生长快的特性使得性别控制研究倍受重视。本文利用EST提示信息,通过RACE等方法克隆性别相关基因Wingless-type MMTV integration site family, member4 (wnt4)、androgen receptor(ar)、LIM homeobox 1(Lhx1)和R-sponding 1(rspo1)等,通过RT-PCR和real-time PCR分析其在牙鲆雌雄成鱼各组织分布,以及wnt4和Lhx1在性腺发育各期的表达特征,并比较了wnt4和cyp19a1a、dmrt1在幼鱼性腺分化期的表达趋势,从而为鱼类性别控制研究提供了基础数据。 牙鲆wnt4基因全长cDNA序列(GenBank Accession No.JX999942)为1584bp,包括5’非翻译区129bp,3’非翻译区396bp,开放阅读框1059bp,编码一条由352个氨基酸残基组成的蛋白序列,包含一个跨膜区及一个wnt家族结构域,同源性比较结果显示与其他硬骨鱼类WNT4a相近。wnt4基因在雌雄鱼各组织中广谱表达,有卵巢强于精巢1.5倍的性别二态性;性腺中仅在III、IV期有递减表达。同时比对了cyp19a1a、dmrt1与wnt4在牙鲆雌核发育和高温性反转幼鱼性腺分化期的表达,发现wnt4在整个性腺分化过程中处于缓慢递增状态,并且在精巢分化前有突然的升高,可以认为wnt4在幼鱼性腺分化期起到了一定的作用。 牙鲆ar基因全长cDNA序列为3215bp,包括5’非翻译区97bp,3’非翻译区1051bp,开放阅读框2067bp,其DBD区域上有与性别相关基因er、Pax4、Pax6的结合位点,并预测到5’UTR和ORF上有一个840bp长度的CpG岛。牙鲆ar基因编码一条由688个氨基酸残基组成的蛋白序列,同源性比较显示较接近于硬骨鱼类ARa。ar基因在雌雄鱼组织中广谱表达,有精巢强于卵巢1.8倍的性别二态性。 使用TRANSFAC 6.0分析牙鲆erα和erβ基因cDNA序列,并通过genome walking克隆获得了905bp的erα上游启动子区序列。分析发现在erα DBD区域有与性别相关基因Pax4、gata4、oct1和foxl2的结合位点,但是该上游启动子区并没有转录因子结合位点,在其cDNA和启动子区也没有发现CpG岛。同时在erβ DBD区域也发现有与性别相关基因Pax4、oct1的结合位点,并检测到4个长度为228bp、292bp、218bp和359bp的CpG岛。erα在雌雄鱼除肌肉和肾脏以外各组织都有表达,有卵巢强于精巢1.14倍的性别二态性。 牙鲆Lhx1a和Lhx1b基因开放阅读框序列(GenBank Accession No.JX999940&JX999941)为1224bp和1206bp,各编码一条由407和401个氨基酸残基组成的蛋白序列,都包含两个LIM结构域和一个HOX结构域。牙鲆Lhx1a和Lhx1b都仅在性腺、脑和眼中表达,但是Lhx1a仅在精巢中表达,而Lhx1b在卵巢中的表达强于精巢;Lhx1a仅在精巢III和IV期表达,Lhx1b在精巢和卵巢期III、IV期中都有表达。 获得牙鲆rspo1基因783bp的开放阅读框序列,编码一条由260个氨基酸残基组成的蛋白序列,包含两个FU结构域和一个TSP结构域。该基因在雌雄鱼组织中的表达也较为广泛,并且有卵巢略强于精巢的性别二态性。
语种中文
文献类型学位论文
条目标识符http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/17822
专题实验海洋生物学重点实验室
推荐引用方式
GB/T 7714
翁申达. 牙鲆性别相关基因克隆与RT-PCR差异表达谱分析[D]. 中国科学院研究生院,2013.
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牙鲆性别相关基因克隆与RT-PCR差异表(20280KB) 限制开放CC BY-NC-SA浏览
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