IOCAS-IR  > 实验海洋生物学重点实验室
海水养殖病鱼分离菌株的分类和抗生素抗性及抗性基因检测
兰欣
学位类型硕士
导师莫照兰
2013-05
学位授予单位中国科学院研究生院
学位专业海洋生物学
关键词分类地位 16s Rrna 系统发育学分析 抗生素抗性基因 整合子
摘要细菌性疾病是我国海水养殖鱼类的主要病害,细菌的抗生素耐药成为环境和食品安全的重要问题。本研究对1999年-2012年从山东、江苏、河北、天津等沿海地区养殖场发病鱼分离得到进行细菌菌株分类地位、抗生素抗性及抗性基因的分析,获得我国北方海水养殖鱼类的可疑细菌病原种类及耐药信息,为疾病控制、提高水产品质量提供理论指导。 1. 分离菌株的分类地位。对124株菌进行了16S rRNA基因序列和系统发育学的分析。对菌株进行16S rRNA基因序列的扩增和测序,得到的序列与GenBank核酸序列数据库进行相似性比对分析,结果显示有83株为弧菌属(Vibrio sp.)细菌,11株为气单胞菌属(Aeromonas sp.)细菌,4株为爱德华氏菌属(Edwardsiella sp.)细菌, 3株为假单胞菌(Pseudomonas sp.)属细菌,3株为假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas sp.)细菌,20株为其他13种属的细菌。根据系统发育学分析结果,进一步将77株菌鉴定为18个种,优势种为溶藻弧菌(V. alginolyticus),哈氏弧菌(V. harveyi),鳗弧菌(V. anguillarum),杀鲑气单胞菌(A. salmonicida),迟缓爱德华氏菌(E. tarda)。 2. 分离菌株的耐药性。对230菌株进行了6种抗生素(氨苄青霉素、氯霉素、环丙沙星、呋喃唑酮、利福平和四环素)耐药性的检测。结果显示,氨苄青霉素抗性菌株149,占64.8%;氯霉素的耐药菌株数为29(12.3%);环丙沙星的耐药菌株数为20(8.5%);呋喃唑酮的耐药菌株数为113(48.1%);利福平的耐药菌株数为8(3.4%);四环素的耐药菌株数为24(10.2%)。对二种抗生素耐药的菌株为85 (37.0%),对三种抗生素耐药的菌株为18(7.8%),对四种抗生素耐药的菌株为12(5.2%)。 3. 耐药基因和整合子检测。运用多重PCR的方法分析氯霉素抗性菌株-cat基因和四环素抗性菌株-tet基因的分布特征。结果显示:29株氯霉素抗性菌株中含有catⅠ基因的为41.4%(12株),含有catⅡ基因的为38%(11株),含有catⅢ基因的为13.8%(4株),未检测到catⅣ基因,另外有2株未扩增出目的条带,没有菌株同时携带两个或两个以上的cat基因;24株四环素抗性菌株中主要存在的tet基因是tetB(75%),tetC(16.7%)和tetE(8.3%),有1株菌携带有两种tet基因,为tetC和tetD。 整合子是造成细菌多耐药性的主要原因,对230株已完成药敏实验的菌株进行了Ⅰ型和Ⅱ型整合子的检测,6株菌含有Ⅰ型整合子,其中1株同时含有Ⅰ型和Ⅱ型整合子,有4个菌株含有Ⅰ型整合子的多个不同克隆。这些整合子主要主要编码抗生素抗性基因、转运蛋白或通透酶等。
语种中文
文献类型学位论文
条目标识符http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/17764
专题实验海洋生物学重点实验室
推荐引用方式
GB/T 7714
兰欣. 海水养殖病鱼分离菌株的分类和抗生素抗性及抗性基因检测[D]. 中国科学院研究生院,2013.
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