中国明对虾繁殖和免疫相关功能基因的重组表达和免疫组织化学研究

IOCAS-IR > 实验海洋生物学重点实验室

	中国明对虾繁殖和免疫相关功能基因的重组表达和免疫组织化学研究
	温荣
学位类型	硕士
导师	李富花
	2011-05-23
学位授予单位	中国科学院研究生院
学位专业	海洋生物学
关键词	中国明对虾功能基因重组表达抗体制备免疫组化
摘要	重组表达是对阐明基因功能的重要技术之一。本论文在前期对对虾重要功能基因进行研究的的基础上，选取了中国明对虾免疫调节通路中的重要转录因子：Relish、Dorsal 以及对虾卵巢发育密切相关基因：细胞凋亡易感性蛋白（cell apoptosis susceptibility protein, CAS）和精原干细胞生成因子（spermatogonial stem cell renewal factor，SSCRF）进行了重组表达研究，优化了这四种重要基因的原核重组表达技术，获得了它们的重组表达蛋白，并制备了多克隆抗体，利用免疫组织化学技术研究了CAS 和SSCRF在对虾性腺中的分布。利用大肠杆菌表达系统成功得到了 His-Relish、 His-Dorsal、 GST-CAS 和 GST-SSCRF融合蛋白，分子量分别为30kDa、39 kDa、39 kDa、44kDa。分别利用 His Trap FF crude Kit 和MagneGST™ Protein Purification System 对四种重组蛋白进行了纯化，获得重组蛋白的纯品。将纯化后的 His-Relish、His-Dorsal 融合蛋白免疫兔子，获得兔抗His-Relish 和兔抗 His-Dorsal 的多克隆抗血清。另将纯化后的 GST-CAS 和GST-SSCRF 融合蛋白免疫小鼠，制备了鼠抗 GST-CAS 和鼠抗 GST-SSCRF的多克隆抗体。经 Western Blot 检测，发现获得的多克隆抗体均能与目的抗原发生特异的抗原-抗体反应。利用制备获得的鼠抗 GST-CAS 和鼠抗 GST-SSCRF 多克隆抗体研究了CAS和SSRF在二倍体对虾和三倍体对虾性腺中的分布，结果表明：（1） . CAS广泛分布在二倍体对虾卵巢卵母细胞的细胞质及细胞核周围。说明 CAS 可能通过参与对虾卵巢细胞的细胞质与细胞核之间的物质运输过程调控对虾卵母细胞的发育；（2）. SSCRF 存在于二倍体对虾的精巢和三倍体对虾的卵巢细胞中，而在二倍体对虾卵母细胞中不存在。这一结果说明 SSCRF 可能与三倍体对虾卵巢发育异常有关。以上研究为进一步阐明所研究基因在对虾免疫和卵巢发育中的作用机制奠定了重要基础。
语种	中文
文献类型	学位论文
条目标识符	http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/17752
专题	实验海洋生物学重点实验室
推荐引用方式 GB/T 7714	温荣. 中国明对虾繁殖和免疫相关功能基因的重组表达和免疫组织化学研究[D]. 中国科学院研究生院,2011.

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中国明对虾繁殖和免疫相关功能基因的重组表（3294KB）			限制开放	CC BY-NC-SA	浏览