褐藻硫酸多糖GFS的微量分析及初步药代动力学研究

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	褐藻硫酸多糖GFS的微量分析及初步药代动力学研究
	张文静
学位类型	硕士
导师	张全斌
	2013-05
学位授予单位	中国科学院研究生院
学位专业	海洋药物学
关键词	褐藻硫酸多糖高效液相-柱后荧光衍生荧光光谱法微量分析药代动力学
摘要	海带中提取的褐藻硫酸多糖（GFS）在治疗慢性肾衰竭（CRF）和糖尿病肾病（DN）方面效果显著，但要将其开发为海洋创新药物，目前尚缺少有效的分析方法进行药代动力学研究。一方面是因为多糖没有生色团或发色团，不能用传统的方法进行检测，另一方面，多糖进入体内经代谢后，血液及组织中多糖含量很低，这在一定程度上使多糖的药代动力学研究更加困难。因此迫切需要建立一种对GFS检测灵敏度高，简便易操作的微量分析方法。本论文在光谱法GFS衍生条件分析的基础上，对更适合于GFS的微量分析的高效液相-柱后荧光衍生法进行条件优化，并研究了静脉注射GFS的新西兰兔的血清样品的初步药代动力学。通过对血清样品预处理的比较研究，发现采用超滤（MWCO 50KDa）对血清样品进行预处理，可以有效去除蛋白质等其他杂质的干扰，同时加入0.5mol/L氯化钠可以增加结合型药物的解离度，提高GFS的回收率。衍生化反应与反应试剂的浓度、反应温度和时间密切相关。本论文对衍生反应条件进行了优化，荧光光谱法确定最佳衍生条件为：100 mmol/L盐酸胍，0.5 mol/L氢氧化钠，反应温度120℃，反应时间20 min。检测最佳激发波长Ex=255 nm；最佳发射波长Em=430 nm。同时发现冷却和快速检测能提高荧光强度，但加入硼砂，氯化钠，乙腈，PBS等试剂对衍生反应的结果影响很小。在光谱学研究的基础上，使用高效液相-柱后荧光衍生法对衍生条件优化，得到最佳衍生条件为200 mmol/L 盐酸胍，0.5 mol/L氢氧化钠及反应温度125℃。方法学评价表明该方法检测限低，重现性好，回收率高，可用于血清中GFS的微量分析。新西兰兔单次静脉注射GFS后血清样品血药浓度在5 min达到最高，并在6h后检测不到，绘制药时曲线和各项药代动力学参数测定发现GFS符合二房室模型，t1/2α=11.24 ± 2.93 min；t1/2β=98.20 ± 25.78 min。单次灌胃给药GFS的血清样品在2h左右血药浓度达到最大值。比较光谱学和高效液相-柱后荧光衍生法，表明高效液相-柱后荧光衍生法是一种高灵敏度，重现性好，准确度高和易操作的方法，可成功应用于多糖的微量分析及药代动力学研究
语种	中文
文献类型	学位论文
条目标识符	http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/17732
专题	海洋生物技术研发中心
推荐引用方式 GB/T 7714	张文静. 褐藻硫酸多糖GFS的微量分析及初步药代动力学研究[D]. 中国科学院研究生院,2013.

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褐藻硫酸多糖GFS的微量分析及初步药代动（2146KB）			限制开放	CC BY-NC-SA	浏览