实验海洋生物学重点实验室知识库

三阴性乳腺癌由于其特殊的分子分型特征，如ER（雌激素受体）表达阴性、PR（孕激素受体）表达阴性和HER2（人表皮生长因子受体）不过度表达等。导致诸多针对乳腺癌的临床药物缺乏既定的雌激素靶点，且化疗具有诸多副作用，包括毒副作用以及耐药性等。因此，开发新型的抗三阴性乳腺癌药物十分必要。

天然卤代化合物具有良好的生物活性，但由于其结构和数量受限，因而化学组合设计合成卤代化合物逐渐成为药物研发的一大热点。以噻唑胺基作为结构母核添加活性基团后，进行卤素取代，可以改善化合物物理及化学性质，由此得到了一系列化合物。其中发现溴代苯甲醚类杂合物TSC-2C对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231具有良好的增殖抑制活性；抑制细胞的迁移和侵袭能力，最终诱导细胞凋亡。这提示我们卤素取代的噻唑胺基对于抗肿瘤药物的合成具有指导意义。

同时，我们发现该系列化合物中的氟代噻唑类化合物TSC-3C，对MDA-MB-231细胞株最为敏感，其IC₅₀为2.79 μM左右，且对正常细胞无毒性。研究发现化合物TSC-3C抑制MDA-MB-231细胞的科龙形成以及迁移侵袭能力，干扰线粒体膜电位及功能，影响线粒体内外蛋白含量；通过对作用机制的进一步探究，我们发现化合物TSC-3C影响了MAPK信号通路的相关蛋白变化，由此推测TSC-3C通过调节MAPK信号通路最终诱导MDA-MB-231细胞凋亡以实现其抗肿瘤活性。这为今后TSC-3C开发为靶向抑制三阴性乳腺癌的抗肿瘤药物奠定基础，也为该类化合物对于抗肿瘤药物的设计与合成提供一定的科学依据，对揭示MAPK通路在乳腺癌发生及发展中的作用和三阴性乳腺癌药物的研发具有理论意义。

目 录

第1章 引言 1

1.1 三阴性乳腺癌的研究现状 1

1.1.1 基底细胞样亚型三阴性乳腺癌 3

1.1.2 Claudin低表达亚型 4

1.1.3 基于激酶基因表达水平的ER乳腺癌子分类 5

1.1.4 根据治疗意义分类的三阴性乳腺癌亚型 5

1.2 三阴性乳腺癌靶向药物研究进展 6

1.2.1 PARP抑制剂的研究进展 6

1.2.2 PI3K/AKT/mTOR通路的抑制剂 8

1.2.3 促分裂原活化蛋白激酶MAPK信号通路的抑制剂 8

1.3 卤代化合物及其活性概述 9

1.4 本研究的目的及意义 9

第2章 溴代苯甲醚类化合物TSC-2C的抗肿瘤活性研究 11

2.1 研究背景 11

2.2 材料与方法- 13

2.2.1 溴代苯甲醚类化合物TSC-2C的合成 13

2.2.2 细胞培养 15

2.2.3 化合物溶液的配制 17

2.2.4 细胞增殖实验 18

2.2.5 克隆斑的形成实验 19

2.2.6 伤口愈合划痕实验 19

2.2.7 细胞侵袭实验 20

2.2.8 化合物诱导凋亡实验 21

2.2.9 统计学分析 22

2.3 实验结果- 22

2.3.1 化合物TSC-2C抑制MDA-MB-231细胞的增殖 22

2.3.2 化合物TSC-2C影响MDA-MB-231的克隆斑形成 22

2.3.3 化合物TSC-2C降低MDA-MB-231细胞迁移活性 24

2.3.4 化合物TSC-2C减弱MDA-MB-231细胞侵袭能力 25

2.3.5 化合物TSC-2C诱导MDA-MB-231细胞发生凋亡 26

2.4 分析与讨论 27

2.5 小结 27

第3章 氟代噻唑肼类化合物TSC-3C的体外细胞株筛选及机制研究 29

3.1 研究背景 29

3.2 材料与方法 30

3.2.1 氟代噻唑肼类化合物TSC-3C的合成 30

3.2.2 化合物TSC-3C溶液的配制 31

3.2.3 细胞株及培养 32

3.2.4 细胞毒实验 32

3.2.5 克隆斑的形成实验 33

3.2.6 伤口愈合划痕实验 33

3.2.7 细胞侵袭实验 33

3.2.8 检测细胞内线粒体膜电位（∆Ψm） 34

3.2.9 细胞早期凋亡实验 35

3.2.10 Western blotting分析 35

3.3 实验结果 43

3.3.3 氟代化合物TSC-3C可显著抑制肿瘤细胞生长 44

3.3.4 化合物TSC-3C抑制MDA-MB-231细胞增殖与克隆斑形成 46

3.3.5 化合物TSC-3C显著影响MDA-MB-231细胞的迁移侵袭能力 46

3.3.6 化合物TSC-3C导致MDA-MB-231细胞的线粒体损坏 48

3.3.7 化合物TSC-3C诱导MDA-MB-231细胞发生凋亡 50

3.3.8 化合物TSC-3C影响MAPK信号通路 51

3.4 分析与讨论 52

3.5小结 54

第4章：结论与展望 55

参考文献 57

致谢 65

作者简历及攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 67