Institutional Repository of Key Laboratory of Ocean Circulation and Wave Studies, Institute of Oceanology, Chinese Academy of Sciences
| 牙鲆rag基因的克隆及表达研究 | |
| 王先磊 | |
| 学位类型 | 博士 |
| 2006-06-09 | |
| 学位授予单位 | 中国科学院海洋研究所 |
| 学位授予地点 | 海洋研究所 |
| 关键词 | 牙鲆（paralichthys Olivaceus） Rag1 Rag2 Rt-pcr 原位杂交（ish） 重组 表达 |
| 摘要 | 牙鲆在中国北方沿海地区形成了大规模的工厂化养殖，成为我国海水养殖的一大重要产业。然而疾病的频繁发生严重阻碍了这一产业的发展，为了保证牙鲆产业稳定、健康、持续地发展，开展鱼类免疫系统的基础研究，提高鱼类抵抗病原菌侵害的能力，本研究从牙鲆免疫系统的个体发育过程入手，克隆了其rag（recombination activating gene）基因，在此基础上对其组织特异性表达进行了分析。 研究结果表明牙鲆rag1基因由4个外显子和3个内含子组成，第一个外显子位于5’非翻译区，这一外显子存在两种不同的剪切方式。牙鲆rag1基因编码1068个氨基酸。牙鲆rag2基因的编码区序列长为1602 bp，编码533个氨基酸，没有在牙鲆rag2基因编码区内发现内含子的存在。rag基因间序列长为3128 bp，两个基因共用一段3’非编码区。 本试验通过RT-PCR检测发现，牙鲆的rag1和rag2基因在头肾和体肾中均有表达。整装原位杂交结果表明，牙鲆在受精后第8天开始起有rag1和rag2基因的表达，主要在胸鳍前面，腮背部的部位表达，这个区域与后来胸腺出现的位置相一致。冰冻切片结果显示，rag是在靠近咽部的区域有表达。石蜡切片原位杂交结果显示，rag基因在胸腺中的表达显示出不均一性，着色较深的为皮层区，而着色比较浅的为髓部。 将牙鲆rag1基因的一部分（编码559个氨基酸）和rag2全基因序列（编码533个氨基酸）插入到表达质粒pProEXTM HTa上，在大肠杆菌E. coli BL-21中进行体外表达与分析，结合BD TALONTM Metal Affinity Resins亲和柱纯化了RAG2蛋白。 |
| 页数 | 107 |
| 语种 | 中文 |
| 文献类型 | 学位论文 |
| 条目标识符 | http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/1531 |
| 专题 | 海洋环流与波动重点实验室 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 王先磊. 牙鲆rag基因的克隆及表达研究[D]. 海洋研究所. 中国科学院海洋研究所,2006. |
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| 文件名称/大小 | 文献类型 | 版本类型 | 开放类型 | 使用许可 | ||
| 10001_20031800680152（2309KB） | 限制开放 | -- | 浏览 | |||
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