栉孔扇贝肽聚糖识别蛋白CfPGRP-S1的重组与活性鉴定

IOCAS-IR > 海洋环流与波动重点实验室

	栉孔扇贝肽聚糖识别蛋白CfPGRP-S1的重组与活性鉴定
其他题名	Recombination and Functional Identification of Chlamys Farreri CfPGRP-S1
	王婉
学位类型	博士
	2009-05-28
学位授予单位	中国科学院海洋研究所
学位授予地点	海洋研究所
关键词	肽聚糖识别蛋白固有免疫重组表达抑菌活性
摘要	肽聚糖识别（PGRPs）蛋白家族作为一种主要的模式识别受体，在免疫识别中发挥重要的作用。本研究以栉孔扇贝为对象，采用分子生物学手段，原核重组肽聚糖识别蛋白，并对其功能进行深入研究。用SWISS-MODEL预测蛋白三维结构, 显示CfPGRP-S1与其它PGRPs、Ⅱ型噬菌体酰胺酶有着类似的晶体结构。由于含有酰胺酶活性所必需的保守氨基酸位点H112, H221, C229和T277，CfPGRP-S1很有可能是一个N-乙酰胞壁酸-L-丙氨酸酰胺酶。在糖结合试验中，CfPGRP-S1蛋白不可逆的结合肽聚糖和几丁质的作用，证实了CfPGRP-S1对肽聚糖和几丁质两种微生物表面保守分子模式的识别功能。在后续的菌结合试验中，CfPGRP-S1蛋白能与一系列的革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌结合，其中包括溶壁微球菌、枯草芽孢杆菌、鳗弧菌、大肠杆菌和毕赤酵母菌。由此可见，CfPGRP-S1不仅仅识别肽聚糖，还能识别其他一些分子，如几丁质，并对多种类型的微生物起着免疫识别作用。 CfPGRP-S1蛋白对溶壁微球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌有直接杀灭作用，最小抑菌浓度分别为2 μg/mL、2 μg/mL、4 μg/mL，对革兰氏阳性菌的抑菌活性大于革兰氏阴性菌，而对真菌只有微弱的抑制作用，这可能是因为菌细胞壁组分和结构上的差异造成的。CfPGRP-S1蛋白对栉孔扇贝病原菌鳗弧菌的生长却没有任何影响，推测该蛋白可能在非致病性菌的免疫防御中起到了重要作用。 CfPGRP-S1蛋白既具有免疫识别功能，又起到免疫效应分子的作用，对多种非致病菌具有直接杀灭作用。本研究结果为深入了解栉孔扇贝固有免疫的机制提供理论基础。
其他摘要	Peptidoglycan recognition (PGRPs) protein family is major pattern recognition receptors and plays an important role in immune recognition. In this study, CfPGRP-S1 protein was recombinated and in-depth functional study was conducted. By using homology modeling server SWISS-MODEL, three-dimensional structure of CfPGRP-S1 was predicted, showing it has a similar crystal structure with other PGRPs and type 2 bacteriophage amidases. Since the amino acid residues necessary for the amidase activity are conserved(H112, H221, C229 and T277), CfPGRP-S1 is most likely a N-acetylmuramoyl–L -alanine amidase. Recombinant CfPGRP-S1 protein bind peptidoglycan and chitin with high affinity, and recognize a wide range of gram-positive bacteria, gram-negative bacteria and fungi，including M. luteus、 Bacillus subtilis、 E. coli、 V. anguillarum and Pichia pastoris. Despite being named peptidoglycan recognition protein, CfPGRP-S1 can not only recognize peptidoglycan, but also a number of other moleculars, such as chitin, suggest it also plays a role in fungal immune defense. CfPGRP-S1 protein has bacteriostatic activity against both Gram-positive and Gram-negative bacteria, and more active against Gram-positive bacteria, the minimal inhibitory concentration for Micrococcus, Bacillus subtilis, E. coli were 2μg/mL, 2μg/mL, 4μg/mL, respectively. CfPGRP-S1 protein only weakly inhibited the growth of fungus Pichia pastoris and had no effect on Vibrio anguillarum.
页数	59
语种	中文
文献类型	学位论文
条目标识符	http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/1441
专题	海洋环流与波动重点实验室
推荐引用方式 GB/T 7714	王婉. 栉孔扇贝肽聚糖识别蛋白CfPGRP-S1的重组与活性鉴定[D]. 海洋研究所. 中国科学院海洋研究所,2009.

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