玻璃海鞘多肽PCI的分离纯化及其抗血管生成活性研究

IOCAS-IR > 海洋环流与波动重点实验室

	玻璃海鞘多肽PCI的分离纯化及其抗血管生成活性研究
其他题名	Isolation of antiangiogenesis peptide from Coina intestinalis（PCI） and study of its antiangiogenesis activity
	董平原
学位类型	硕士
导师	林秀坤
	2007-06-15
学位授予单位	中国科学院海洋研究所
学位授予地点	海洋研究所
学位专业	海洋生物学
关键词	玻璃海鞘多肽抗血管生成
摘要	血管生成是肿瘤生长、发展的必经之路，并且与实体瘤的发生、转移有着密切的关系，抑制肿瘤新生血管生成具有特异性高、疗效好、不易产生耐药性以及毒副作用低等特点，因此抑制肿瘤血管形成可望成为治疗癌症的一个突破点，以抗血管生成为主的肿瘤生物治疗研究已成为近十年的研究热点。玻璃海鞘（Coina intestinalis）属于内性目、玻璃海鞘科，因其进化上的独特地位常作为研究神经发育、免疫系统进化的材料。在其它种属的海鞘中分离发现了多种具有抗肿瘤活性的多肽，但关于玻璃海鞘抗血管生成活性多肽的分离纯化和活性研究未见报道。本文利用多种分离纯化手段，采用活性追踪的方法首次从玻璃海鞘中分离得到具有抗新生血管生成作用的多肽，并对其抗血管生成活性做了初步研究。本研究利用冷丙酮分级沉淀，超滤截留分子量小于5kDa的蛋白，再经SephadexG25、Superdex75柱层析，µRPC C2/C18反相柱层析等分离手段，采用活性追踪的方法，由玻璃海鞘（Coina intestinalis）中分离纯化出抗血管生成多肽PCI，据保留时间计算其分子量为1.8 kDa。MTT检测表明其对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）具有强烈的抑制作用，IC50为7.5 μg/ml，并对多种肿瘤细胞有直接的抑制作用。斑马鱼胚胎体内实验进一步表明PCI在40 μg/ml的浓度下作用12h，斑马鱼胚胎新生血管生成受到显著抑制，肠下静脉血管长度为正常组的30%，斑马鱼胚胎血管生成率为正常组的45%。
其他摘要	Angiogenesis is the essential pathway of the tumor growth and metastasis, and have compact relation with the arision and diversion of solide tumor. Many tumors occour clinic symptom only after new blood vessels formade. Antiangiogenic therapy is thought to be free of the severe side dffects and being a breakthrough of the last severaldecades. Coina intestinalis is the major material of nevers’ development reseach and immune system evolution, and was translated the genome at 2002. Many anticancer peptides were pured in other class of tunicate without reports about peptides with antiangenesis activity from Coina intestinalis. This paper got a peptide using many isolated metherds and did some research about its antiangensis activeity. Angiogenesis peptide (PCI) was isolated from the Coina intestinalis. The Coina intestinalis were deposited with 70% acetone water solution following by gel chromatography of SephadexG25. After the Superdex75 FPLC assay, the peptides BLF-2 ware obtained. Cell proliferation assay in vitro, using MTT method showed that the concentrations of BLF-2 required for 50% growth inhibition of HUVECs was 8 μg/ml. Zebra fish angiogenesis model in vivo, showed the BLF-2 inhibited the growth of SIV of zebrafish embryos significantly in a dose-dependent manner and SIV of zebrafish embryos treated with 40 μg/ml BLF-2 for 12h was observed almost complete inhibiton.
页数	53
语种	中文
文献类型	学位论文
条目标识符	http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/1367
专题	海洋环流与波动重点实验室
作者单位	中国科学院海洋研究所
推荐引用方式 GB/T 7714	董平原. 玻璃海鞘多肽PCI的分离纯化及其抗血管生成活性研究[D]. 海洋研究所. 中国科学院海洋研究所,2007.